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MicroRNA主要通过作用于靶基因的 3’UTR 起作用,可以通过相关软件和网站进行靶点预测。预测到靶点之后,将目的基因 3’UTR 区域构建至psicheck2载体中,通过比较野生型UTR和突变体UTR载体中报告基因表达的改变(监测萤光素酶活性的变化),可以定量反映 miRNA 对目的基因的结合作用,也即用荧光值来判断miRNA是否和靶基因结合。纽赫生物推出“MicroRNA靶基因验证服务”,为客户寻找或验证microRNA的靶基因。实验流程如下:1. 构建靶基因3’UTR报告载体、含突变靶点的3’UTR报告载体。2. 将miRNA mimics、NC mimics与靶基因3’UTR报告质粒共转染至293T工具细胞中。3. 检测荧光素酶活性,确定目的microRNA和目的基因之间的关系。4. 构建含突变靶位点的荧光素酶报告基因载体。5. 处理数据图1. psicheck2质粒图谱,用于构建靶基因3’UTR报告载体、含突变靶点的3’UTR报告载体图2. 双荧光素酶报告系统检测mmu-miR-1a-3p与X-gene之间的相互作用
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