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DNA甲基化水平检测原理:DNA甲基化是表观遗传学的重要研究内容之一,它可以抑制基因的表达。甲基化通常发生在胞嘧啶的C5位,形成5-甲基胞嘧啶(5mC),甲基化的胞嘧啶多位于CpG岛上。甲基化特异性PCR (MSP)是一种检测基因组DNA甲基化水平的常用方法。该法是将DNA经Sodium bisulfite处理,非甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变。在PCR反应时,设计两套不同的引物对:一对引物序列针对经Sodium bisulfite处理后的甲基化DNA链设计,若用该对引物能扩增出片段,说明该检测位点发生了甲基化;另一引物针对经Sodium bisulfite处理后的非甲基化DNA链设计,若用该对引物能扩增出片段,说明该检测位点没有甲基化。两对引物都具有很高的特异性,与未经处理的DNA序列无互补配对。 实验流程:1. 序列分析及MSP引物设计;2. 基因组DNA抽提及体外甲基化处理;3. MSP;4. MSP产物测序。 相关要求(客户提供):1. 客户提供待测基因准确信息序列或NCBI序列链接;2. 客户提供甲基化修饰试剂盒。 最终结果:1. MSP产物电泳图;2. 具体实验流程(包括:实验步骤;主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号;试剂厂家、批号));3. 相关结果分析:1) 甲基化分析,筛选差异甲基化位点;2) 基因启动子区域甲基化位点分析;3) CpG岛区域甲基化水平差异分析。组蛋白甲基化原理:发生在H3、H4的Lys和Asp残基上,可以与基因抑制有关,也可以与基因的激活相关,这往往取决于被修饰的位置和程度。精氨酸可以被甲基化一次(称为一甲基精氨酸)或两次(精氨酸甲基转移酶(PRMTs)将两个甲基同时转移到精氨酸多肽末端的同一个氮原子上成为非对称性甲基精氨酸,或者在每个氮端各加一个甲基成为对称性二甲基精氨酸)赖氨酸经赖氨酸转移酶的催化可以甲基化一次、两次或三次。在组蛋白中,蛋白质甲基化是被研究最多的一类。在组蛋白转移酶的催化下,S-腺苷甲硫氨酸的甲基转移到组蛋白。某些组蛋白残基通过甲基化可以抑制或激活基因表达,从而形成为表观遗传。蛋白质甲基化是翻译后修饰的一种形式。 检测方式:客户提供待检测细胞,如为组织另收取蛋白提取费用,相应检测抗体。Western blot 检测组蛋白甲基化水平/甲基化转移酶/去甲基化酶水平。 最终结果:实验原始数据;具体试验流程(包括:实验步骤;主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号;试剂厂家、批号))。
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