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直接测序法SNP原理:人类基因组中存在着广泛的多态性,最简单的多态形式是发生在基因组汇总的单个核酸的替代,即单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms, SNPs)。SNP通常是一种二等位基因(biallelic),即二态的遗传变异,SNP的数量大,分布广,在组成人类基因组的30个基因定位,关联分析,个体疾病易感性分析与药物基因组学的研究中发挥着越来越重要的作用。在所有SNP的检测方法中,对待检测片段进行直接扩增、测序是最为准确直接的方法,也是SNP分析的金标准。通常情况下,纯合型SNP位点的测序峰图为单一峰型,而杂合型SNP位点的测序峰图为套峰,因而很容易将其区分开来。通过直接测序方法进行SNP检测的检出率接近100%。适用范围:直接测序法分析SNPs适用于数量较少、SNP位点间距小的样品 实验流程:1. 待测样品基因组DNA提取;2. 根据不同的区域SNP位点进行引物设计、合成;3. 对所有样品进行PCR扩增并纯化;4. 测序;5. 结果统计分析及报告。 相关要求(客户提供):客户请提供准确的基因名称和序列以及详细的SNP位点信息。 样品要求: 1. 血液样品(至少4 ml、需加EDTA),针对血液样品,根据实际情况酌情加收DNA提取费用; 2. 如客户提供基因组DNA样品,需-20度条件下保存和运输。 纯度要求:OD260/280在1.6-1.8之间;OD260/230在1.8-2.2之间。 浓度要求:基因组DNA浓度>100 ng/ul。 最终结果:1. 待测基因PCR产物的琼脂糖凝胶电泳图片;2. 电子版测序数据及具体试验流程(包括:实验步骤;主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号;试剂厂家、批号));3. 测序结果分析;4. 实验数据及实验剩余的样品和引物。
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