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TA克隆原理:把PCR片段与一个具有3-T突出的载体DNA连接起来的方法。因为PCR反应中所适用的聚合酶具有末端转移的活性,通常在3’端加上A。例如:Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能,PCR反应时在每条PCR扩增产物的3'端自动添加一个3’A突出端。只有用经过特殊处理的具有3’T突出末端的DNA片断才能通过T/A配对进行连接。通过PCR的方法扩增目的基因片断的过程中,由于往往不清楚目的基因的DNA序列,获得的目的片断通常需要通过TA克隆的方法,重组到T-载体中,通过序列测定清楚DNA序。服务流程:1. 检测样品DNA片段长度和浓度。2. 加“A”尾巴(若PCR产物已有“A”尾巴则无需此步骤)3. PCR产物与载体连接4. 转化并筛选重组子5. 重组子测序6. 测序结果分析7. 重组质粒纯化相关要求:客户提供待测基因详细信息。最终结果:1. 纯化后重组质粒;2. 具体试验流程(包括:实验步骤;主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号;试剂厂家、批号));3. 原始数据及相关结果分析。
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