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瞬时转染
相关知识: 采用瞬时转染的方法能够方便快捷地对基因功能进行研究与分析,且基因表达水平高,但通常只持续几天,多用于启动子和其他调控元件的分析。一般来说,超螺旋质粒DNA转染效率较高,在转染后24-72小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来帮助检测。实验流程:1)质粒:a. 进行预实验,通过转染含有报告基因的质粒优化转染条件;b. 转染条件确定后,按照客户方案进行转染;c. qPCR或Western Blot检测转染效率。 2)SiRNA:a. 根据基因序列,设计并合成siRNA;b. 进行预实验,通过转染带有荧光标记的阴性对照siRNA优化转染条件;c. 通过qPCR和Western Blot验证siRNA的沉默效率,筛选siRNA最佳使用浓度。
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