实验步骤 1.石蜡切片免疫组化:①67°C烘箱烘片2小时,常规脱蜡至水.用pH 7.4的PBS冲洗三次。每次3 min ;②将切片置于沸腾的柠檬酸盐缓冲液中中档微波处理10 min ,蒸馏水冲洗三次。PBS冲洗三次,每次3 min;③3%H202室温孵育10 min阻断内源性过氧化物酶的活性, PBS冲洗三次,每次3 min ;④5~10%正常山羊血清(PBS稀释)封闭.室温孵育10 min ,吸去血清后滴加稀释至适当比例的一抗。37*C孵育1-2 h或者4°C孵育过夜;⑤PBS冲洗三次,每次3 min ;滴加稀释至适当比例的带标记:二抗.379C孵育10~30 min , PBS冲洗三次,每次3 min ;⑥滴加适当比例稀释的辣根酶标记物工作液. 379C孵育10-30 min, PBS冲洗三次。每次3 min;⑦显色剂显色.自来水充分冲洗,复染细胞核,酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。2冰冻切片免疫组化: ①新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片.厚度为5~6 μm ; ②载玻片可不打底,裱片后立刻用电吹风吹干; ③染色前需用冷*酮4°C固定10-20 min : ④PBS洗2次,每次5 min ; . ⑤3%H202灭活内源性过氧化物酶20 min ,需遍光处理; ⑥后续血清封闭与抗体孵育步骤与石蜡切片相似,最后脱水透明封片进行观察。 结果展示: