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cDNA文库cDNA文库是以特定的组织或细胞mRNA为模板,逆转录形成的互补DNA(cDNA)与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌形成重组DNA克隆群,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织或细胞的cDNA文库,具有组织或细胞特异性。cDNA文库构建服务流程1.mRNA的提纯,获得高质量的mRNA ;2.cDNA第一条链的合成3.cDNA第二条链的合成4.双链cDNA的修饰5.双链cDNA的分子克隆6.cDNA文库的扩增7.cDNA文库鉴定评价注意事项:1.RNA的提取(例如异硫*酸胍法,盐酸胍-有机溶剂法,热酚法等等,提取方法的选择主要根据不同的样品而定)。2.要构建一个高质量的 cDNA文库,获得高质量的mRNA是至关重要的,所以处理mRNA样品时必须仔细小心。3.由于RNA酶存在所有的生物中,并且能抵抗诸如煮沸这样的物理环境,因此建立一个无RNA酶的环境对于制备优质RNA很重要。4.文库构建要选择合适的载体,常规用的是λ噬菌体,这是因为λ DNA两端具有由12个核苷酸的粘性末端,可用来构建柯斯质粒,这种质粒能容纳大片段的外源DNA。5.胶回收前电泳槽,电泳板,梳子等都要用1%的HCI浸泡过夜。6.胶回收时电压要稳定。结果展示实验周期及交付标准1.实验周期:详谈2.交付标准: 根据客户需要,提供包括载体MCS改造,启动子、增强子、筛选标志物等功能元件的改造等,使得经过改造了的载体满足试验研究的需求。需确认的信息1.样品需求量:组织(2~3克) , 细胞( 10^8)总RNA(200 ug) , mRNA(5 ~ 10 ug) ,请务必保持样品新鲜, RNA无任何降解,以确保文库质量2.请尽量提供物种基因组背景资料信息,如:基因组大小,基因平均长度等等。
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