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基因组DNA提取从新鲜组织、血液、细胞、细菌等多种材料中提取基因组DNA,不同种类的材料中提取的基因组DNA量不同,而且差异也比较大,一般材料的基因组DNA提取情况如下:
实验步骤1、贴壁细胞用胰酶消化,离心收集。2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次,离心收集。3、重复2。4、加入5ml DNA提取缓冲液,(10m mol/L Tris-cl,0.1 mol/L EDTA,0.5% SDS),混匀。5、加入25ul 蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀,50℃水浴3h。6、用等体积的酚抽提一次,2500r/min 离心收集水相。用等体积的(酚,氯仿,*戊醇)混合物抽提一次,2500r/min 离心收集水相。用等体积的氯仿,*戊*抽提一次。7、加入等体积的5mol/L 的LiCL,混匀,冰浴,10min。8、2500r/min,离心10min. 转上清与一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10分钟。9、2500r/min,离心10min。弃上清。加入0.1倍 体积3mol/L 乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃ 20分钟。10、12000r/min, 室温离心5分钟。弃上清。将DNA溶于适量TE中。结果展示:实验完成周期及交付标准:1.实验周期: 1周2.交付标准:基因组DNA、完整实验报告(电泳照片、OD值测定结果等)需确认的信息(客户提供):1.新鲜材料或正确保存条件下材料(组织、细胞、细莹等)2.4°C保存一周,-20°C保存一个月, -80°C保存一年血液样品 (EDTA,肝素,柠檬酸钠抗凝)3.详细的背景资料:来源、特点类型等报价:
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