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简介基因的功能研究可分为loss-of-function和gain-of-function,即通过过表达该基因和抑制内源基因的表达的手段来研究某个基因的生物学功能。常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。 2.1瞬时转染采用瞬时转染的方法能够方便快捷地对基因功能进行研究与分析,且基因表达水平高,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。 2.1.1瞬时转染—质粒 服务流程:1.进行预实验,通过转染含有GFP报告基因的质粒优化转染条件;2.转染条件确定后,按照客户方案进行转染;3.Q-PCR或Western Blot检测转染效率. 2.1.2瞬时转染——siRNA由于小分子的转染效率较高,使基因功能研究中的loss-of-function手段十分有效。 服务流程:1.根据基因序列,设计并合成siRNA;2.进行预实验,通过转染带有荧光标记的阴性对照siRNA优化转染条件;3.通过qPCR和Western Blot等方法验证siRNA的沉默效率,筛选出siRNA最佳使用浓度;4.转染条件确定后,按照客户方案进行转染;5.进行后续检测实验。 2.1.3瞬时转染——microRNA采用瞬时转染的方法能够方便快捷地对miRNAs功能进行研究与分析,而且由于小分子的转染效率较高,对于gain-of-function的研究十分有效,但缺点是小分子在细胞内持续发挥作用的时间较短,对于较长时间才能出现的表型则需要反复转染miRNAs分子。服务流程:1.待研究microRNA订购;2.预测被调控基因引物设计及合成;3.进行预实验microRNA转染条件优化,通过qPCR检测转染后microRNA在细胞内的水平,筛选出microRNA最佳使用浓度;4.转染条件确定后,按照客户方案进行转染;5.进行后续Q-PCR、Western Blot或sensor reporter等检测实验。
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