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逆转录病毒 (Retrovirus) 是一类已知的RNA 病毒。需在逆转录酶的作用下首先将RNA 转变为cDNA,再在DNA 复制、转录、翻译等蛋白酶作用下扩增的一类病毒。该载体系统有两部分组成,一是带有外源基因的重组反转录病毒载体分子,二是能以反式提供病毒结构蛋白的包装细胞,其要求是能高效产生感染靶细胞的重组病毒颗粒,且无野生型的反转录病毒存在,后者是基因治疗安全性的关键问题。 服务流程:1.含目的基因的逆转录病毒载体的构建和纯化提取;2.逆转录病毒表达载体和辅助质粒共转染293T细胞;3.大约在转染48 h后,收获逆转录病毒上清,轻轻地移出上清,用0.45μm的滤膜过滤,或在4℃以500g离心5min以除去活细胞;4.如果在1~2 h内使用逆转录病毒上清,将其放置在冰上,若时间间隔较长时,置于干冰上冰冻,而后转到-70℃贮存;5.融化冰冻的上清,在37℃下加温片刻,立即使用。
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