QuantiTect Probe RT-PCR Kit 试剂盒使用序列特异性探针进行一步法real-time RT-PCR,用于基因表达分析
灵敏检测低拷贝数模板
准确检测各种起始量的模板
可用各种序列特异性探针,用于各种PCR仪
无需优化反应和循环条件
QuantiTect Probe RT-PCR Kit使用序列特异性探针通过一步法real-time PCR对RNA目标序列进行灵敏的定量分析。即用型预混液使用热启动和独特的PCR缓冲液,无需优化即可在各种real-time PCR仪上进行高度灵敏的定量RT-PCR。dNTP混合液含有dUTP,可选择性进行UNG处理。为便于使用,预混液可储存在2–8°C。
性能
QuantiTect Probe RT-PCR Kit含有独特的RT-PCR缓冲液,可促使引物高度特异性的退火并与PCR模板结合。含有的HotStarTaq DNA Polymerase与其他聚合酶相比,具有严格的热启动。
QuantiTect Probe RT-PCR Kit包括HotStarTaq DNA聚合酶和独特的RT-PCR缓冲液,能够高灵敏度的定量检测低拷贝的RNA靶序列,在宽泛的范围内符合线性规律,实现准确定量检测。在同一个管中连续进行逆转录和PCR不会影响灵敏度,通过与两步法real-time RT-PCR的CT值对比可证明。
一步法RT-PCR和两步法RT-PCR有相当的表现cDNA/RNA的量 | 平均CT值 | 平均CT值 |
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(两步法RT-PCR) | (一步法RT-PCR) |
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100 ng | 24.66 | 24.66 |
10 ng | 28.15 | 27.84 |
1 ng | 31.42 | 31.49 |
0.1 ng | 34.80 | 34.56 |
0.01 ng | 37.78 | 37.66 |
CT值来自图"One-step RT-PCR with comparable performance to two-step RT-PCR — A" 和"One-step RT-PCR with comparable performance to two-step RT-PCR — B"的两个扩增曲线。
原理
QuantiTect Probe RT-PCR Kit含有优化的即用型预混液,可使用序列特异性探针对RNA靶序列进行高特异性和灵敏度的real-time定量分析。此试剂盒适用于各种类型的序列特异性探针,包括水解探针检测(如TaqMan和其他双标记探针)、FRET探针和Molecular Beacons。QuantiTect Probe RT-PCR Kit独特的PCR缓冲液含有浓度平衡的K+和NH4+,能促使特异性引物退火,获得高PCR特异性和灵敏度。此外,优化的逆转录酶混合液可从不同量的RNA模板合成cDNA,而HotStarTaq DNA Polymerase具有严格的热启动,可防止非特异性产物的形成。
QuantiTect Probe RT-PCR Master Mix含有dUTP,可在PCR前使用尿嘧啶DNA糖基化酶 (UNG)预处理,保证污染的PCR产物不会影响后续的PCR反应。
2x QuantiTect Probe RT-PCR Kit的组份组份 | 特点 | 优势 |
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HotStarTaq DNA Polymerase | 95oC孵育15分钟即可活化 | 室温下即可构建qPCR反应体系 |
QuantiTect Probe RT-PCR Buffer | NH4+和K+的平衡组合 | 特异性引物退火确保PCR结果可靠 |
dNTP mix | 含有dUTP,会部分替代dTTP,可进行UNG处理 | 可选择进行UNG处理,以消除PCR产物中的残余污染物 |
ROX dye | 在Applied Biosystems或Agilent的PCR仪上进行荧光信号校准 | 可在需要ROX染料的PCR仪上进行准确的定量检测。不会干扰其他real-time PCR仪 |
Omniscript and Sensiscript Reverse Transcriptases | 多种酶,对RNA亲和性高 | RNA、甚至是具有复杂二级结构的RNA均可实现转录 |
操作流程
QuantiTect Probe RT-PCR Kit无需优化反应条件。只需将引物、探针和RNA模板加入到即用型RT-PCR预混液中,即可开始反应。按照使用手册中的实验方案操作,即可快速获得可靠的结果,适用于各种real-time PCR仪。如果需要,可使用UNG进行预处理,去除上一反应残留的PCR产物。
应用
QuantiTect Probe RT-PCR Kit可用在各种real-time PCR仪上对RNA目标序列进行基因表达分析,包括Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche和Agilent的仪器。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上使用时,我们推荐专门为快速PCR研发的Rotor-Gene Probe RT-PCR Kit。
QuantiTect Probe RT-PCR Kit 试剂盒
QuantiTect Probe RT-PCR Kit 试剂盒, 6-6
QuantiTect Probe RT-PCR Kit 试剂盒信息由北京布拉德科技发展有限公司为您提供,如您想了解更多关于QuantiTect Probe RT-PCR Kit 试剂盒报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。