基质辅助激光解吸附质谱(MALDI-TOF) 基质辅助激光解吸附质谱技术(Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time Of Flight )的基本原理是将分析物分散在基质分子中并形成晶体,当用激光照射晶体时,由于基质分子经辐射所吸收的能量,导致能量蓄积并迅速产热,从而使基质晶体升华,致使基质和分析物膨胀并进入气相。MALDI所产生的质谱图多为单电荷离子,因而质谱图中的离子与多肽和蛋白质的质量有一一对应关系。MALDI产生的离子常用飞行时间(TOF)检测器来检测,理论上讲,只要飞行管的长度足够,TOF检测器可检测分子的质量数是没有上限的,因此MALDI-TOF质谱很适合对蛋白质、多肽等生物大分子的研究。
技术特点
MALDI TOF 鉴定方便、快速,可以同时做上百个斑点。
主要用于纯蛋白或简单样本的鉴定,如2DE斑点。
成本较低。
样品要求
蛋白质溶液:纯度> 90%;蛋白质总量> 5 ug,浓度> 0.1 ug/ul。
双向凝胶电泳点:考染、银染点清晰可见。
SDS-PAGE胶条:单一蛋白质,考染、银染条带清晰可见 。
电喷雾电离质谱(ESI-MS) 电喷雾电离质谱(electrospray ionization mass spectrometry,ESI-MS)是在毛细管的出口处施加一高电压,所产生的高电场使从毛细管流出的液体雾化成细小的带电液滴,随着溶剂蒸发,液滴表面的电荷强度逐渐增大,最后液滴崩解为大量带一个或多个电荷的离子,致使分析物以单电荷或多电荷离子的形式进入气相。电喷雾离子化的特点是产生高电荷离子而不是碎片离子,使质量电荷比降低到多数质量分析仪器都可以检测的范围,因而大大扩展了分子量的分析范围,离子的真实分子质量也可以根据质荷比及电荷数算出。