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一、细胞STR鉴定 据统计约30%细胞系被交叉污染或错误辨识,因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗灾难性后果,这浪费大量时间、精力和金钱。 可根据所得的STR检测结果与专业的细胞STR数据库(ATCC、DSMZ等)比对从而推算出样品所属的细胞系或可能的交叉污染的细胞系名称。细胞STR分型检测已经成为目前最常用的细胞鉴定方法。
细胞STR鉴定流程
二、服务项目与方法
三、需要进行细胞鉴定的场景(1) 发表文章或申请课题经费前;(2) 疫苗生产细胞年检(疫苗企业);(3) 重组蛋白表达细胞鉴定(药物研发/生产企业);(4) 一个涉及到细胞试验项目开始/结束时;(5) 使用细胞进行临床治疗(试验)前;(6) 准备冻存保种或已冻存多年的细胞;(7) 新得到的细胞或实验室培养5代以上的细胞;(8) 细胞系表现不稳定或结果与预期差别较大;(9) 异体细胞移植后嵌合情况检查。四、阅微基因细胞鉴定优势多样化的服务内容:对不同物种细胞、不同的应用目的提供相应的检测方案。高度丰富信息:人源细胞检测除国际细胞库指定的8个基因座外增加了12+1个基因座,准确判断交叉污染。高度灵敏:可检测 ng 级DNA,微量样本即可满足需求,并且可以检测到早期污染。高通量和系统化平台:采用自动化分析系统可大量检测及数据分析,结果更加准确、客观。五、人源细胞系鉴定位点
人源细胞鉴定的21个基因座(包含专业数据库要求的8个位点)
六、人源细胞系鉴定逻辑
七、人源细胞STR鉴定分型结果示例
人源细胞鉴定结果示意图(正常)
注:人源细胞的鉴定是通过检测21个基因座的STR分型进行的,人为二倍体,所以在每个基因座上最多会有两个信号峰出现,单峰代表纯合基因型,双峰代表杂合基因型。
人源细胞鉴定结果示意图(交叉污染)
注:原理如上图所示。此图是对人源细胞进行的鉴定结果,其中红圈标出的基因组出现多信号峰(>2个峰)或信号峰比例失衡情况,出现不正常的基因座数量大于等于三个时。认为此株细胞存在污染。八、送样条件DNA :体积≥20μL,浓度≥50 ng/μL细胞悬液或细胞沉淀:细胞数目≥ 106个,样本离心后无沉淀为不合格(注:需冷链运输;不接收培养瓶装贴壁细胞;支原体检测不接受DNA)九、阅微基因资质
十、知名合作单位(1)细胞库:中国科学院上海生科院细胞库、中检院细胞库、北京协和细胞库、武汉大学:中国典型培养物保藏中心、西安第四军医大学细胞库、中科院昆明细胞库等(2)科研院校/机构/医院:北京协和医院、解放军301医院、北大人民医院、四川华西医院、北京大学、清华大学、浙江大学、武汉大学、同济大学、上海交通大学等(3)药物研发/生产单位:康龙化成新药技术有限公司、舒泰神生物制药股份有限公司、江苏恒瑞医药股份有限公司、百济神州生物科技股份有限公司、百泰生物药业有限公司、山东新时代药业有限公司等(4)疫苗公司:科兴疫苗技术有限公司、北京民海生物科技有限公司、浙江普康生物技术股份有限公司、长春百克生物科技股份公司等。
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