TMT(Isobaric tandem mass tag)是由Thermo Scientific公司推出的一种等重同位素标记技术,目前有2标、6标和10标三种试剂,可分别用于对6种或10种不同实验条件的样品进行标记和同时检测。
技术原理
TMT在原理上与iTRAQ技术相同,标记试剂的分子结构也由3部分组成:报告基团(report group)、平衡基团(balance group)和肽反应基团(amine-specific reactive group)。NHS可与肽片段N端的氨基及赖氨酸的ε-氨基高效反应,对样品中几乎全部肽片段进行TMT标记。报告基团和质量平衡基团中含有不同量的13C、15N和18O稳定同位素,使得这两部分总体具有相同的质量。以6标方法为例,标记后,来自不同样品的相同肽片段在一级质谱(MS1)中具有相同的m/z,在二级质谱(MS2)中肽片段经碰撞碎裂(CID或HCD)后释放出不同标记的报告离子,m/z 分别为126、127、128、129、130和131,根据不同报告离子的信号强度,可以对不同样品间的蛋白进行定量比较。
技术优势
应用领域
基础医学、临床诊断:生物标志物,疾病机理机制,疾病分型,个性化治疗等;
生物医药:药物作用机理,药效评价,药物开发等;
农林领域:抗逆胁迫机制,生长发育机制,育种保护研究等;
畜牧业:肉类及乳品质研究,致病机理研究等;
微生物领域:致病机理,耐药机制,病原体-宿主相互作用研究等;
海洋水产:渔业资源,海水养殖,渔业环境与水产品安全等;
生物能源、环境科学领域:发酵过程优化,生物燃料生产,环境危定风险评估研究等;
食品营养:食品储藏及加工条件优化,食品组分及品质鉴定,功能性食品开发,食品安全监检测等。
样品要求
组织类型:动物组织≥100mg、植物组织≥100mg、微生物≥20mg;
细胞样品:每样品细胞量 ≥ 1X107
蛋白提取物:≥100µg
体液:血清/血浆≥200µL、尿液≥1ml、唾液/脑脊液≥1ml、泪液≥1mL、支气管灌洗液≥3ml;
外泌体:≥10µL
FFPE石蜡包埋切片:≥0.3 mm * 0.3 mm
参考文献
[1]. Thompson, A, et al. Tandem mass tags: a novel quantification strategy for comparative analysis of complex protein mixtures by MS/MS. Anal Chem. 2003; 75(8):1895-1904.
[2]. Dayon, L, et al. Relative quantification of proteins in human cerebrospinal fluids by MS/MS using 6-plex isobaric tags. Anal Chem. 2008; 80(8):2921-31.
[3]. Zhuang, G, et al. Phosphoproteomic analysis implicates the mTORC2-FoxO1 axis in VEGF signaling and feedback activation of receptor tyrosine kinases. Sci Signal. 2013; 16; 6(271):ra25.
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