与传统的定量蛋白组分析相比,组蛋白修饰定量分析的关键一步是如何分离纯化得到纯的组蛋白组分。组蛋白都在细胞核,百泰派克公司基于发表在Nature Protocol上的文章:Extraction, purification and analysis of histone,结合自己的实验经验建立了分离纯化组蛋白的实验平台,即把细胞打浆低速离心拿到细胞核,然后用再破碎细胞核,分离组蛋白和DNA,高盐buffer沉掉杂质,HPLC分离纯化得到各种组蛋白组分,进行后续的质谱实验分析。同时,在Nature Protocl文章基础上,为了鉴定和定量更多的组蛋白翻译后修饰信息,我们在酶切过程中会使用2-3中不同的酶对蛋白样品进行酶切,提高了组蛋白在质谱分析过程中的肽段覆盖率,排除因为肽段长度不合适、离子化效率低造成的组蛋白翻译后修饰信息的丢失。