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荧光素酶检测荧光素酶报告基因表达的转录调工常备用来研究培养细胞的生物学特性。荧光素梅是理想的报告基因,因为哺乳动物细胞中不含内源性荧光素酶,一旦转录完成立刻就生成功能性的荧光素酶。
1)构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒;
2)将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其他相关的细胞系,如果此转录因子能够激活靶启动子,则荧光素酶基因就会表达,荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比;
3)加入特定的荧光素酶底物,荧光素酶与底物反应,生产荧光素,通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性,从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。
psiCHECK-2和pGL4.1质粒图谱
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