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Label-free技术即非标记定量蛋白质组分析技术,是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,无需使用昂贵的稳定同位素标签做标记,只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样本中相应肽段的信号强度,从而肽段对应的蛋白质进行相对定量。技术原理每条肽段的丰度(量)与其在MS1中的峰面积或信号强度成正比;而不同样本的同一条肽段在色谱上的保留时间是一致的,因此,可通过对比MS图谱,再整合到相应蛋白,实现对蛋白质在不同样本中的相对表达水平的定量分析。实验流程提取样本中的总蛋白,取出一部分做蛋白浓度测定及SDS-PAGE检测,另取部分进行胰蛋白酶酶解,对酶解肽段除盐后,对样本进行质谱分析及数据分析,如图所示技术特点1、无需标记,操作简单;2、不受比较样品数限制;3、对实验操作稳定性、重复性要求高,要求至少做三次技术重复或生物重复;4、准确性较标记定量差。应用领域1、适合大样本量的定量比较2、对无法用标记定量实现的实验设计,易用label-free技术3、要求物种具有蛋白质参考数据库、EST序列(转录组)或基因组注释信息以上内容最终解释权归苏州普信生物医药科技有限公司所有
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