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碱性磷酸酶染色
碱性磷酸酶染色原理:测定中性粒细胞内碱性磷酸酶活性。当粒细胞内有碱性磷酸酶存在时,在缓冲液(pH9.0-9.8)中,可将温育液中的底物(β甘油磷酸酶)水解为磷酸根和甘油,磷酸根再与磷酸钙中的Ca2+结合为磷酸酸钙沉淀,此沉淀物再与磷酸钴、硫酸铵等起一系列化学反应,最后生成不溶性的黑色硫化钴(CoS),定位于酶活性所在部位。
碱性磷酸酶染色试剂:1、固定液,包含甲醇90ml,甲醛10ml。2、温育液,3.2%β甘油磷酸钠6ml,0.1M硫酸镁溶液6ml,2%磷酸钙9ml,加水至50ml(pH9.8)。固定液及温育液均放在4℃冰箱保存。3、2%磷酸钴溶液。4、1:80稀释硫酸铵溶液。5、2%沙黄溶液。
碱性磷酸酶染色操作:1、涂片置固定液(4℃,30s)。2、水洗数秒。3、放入新鲜温育液,37℃2h。4、取出后,用水(含有数滴2%磷酸钙溶液)冲洗数秒。5、侵入2% 磷酸钴5min,然后用水冲洗。6、侵入新鲜配制的1:80硫酸铵中10s,水洗。7、2%沙黄水溶液中10s复染、水洗。待干(也可用瑞氏染液复染)。结果:阳性反应呈灰黑色至深黑色颗粒状或片块状沉淀,定位于胞浆中。成熟中性粒细胞有此颗粒。
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