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iTRAQ和TMT技术是近年来定量蛋白质组学最常用的高通量筛选技术,可用于筛选样本组之间的差异表达蛋白质,结合生物信息学分析,揭示差异表达蛋白质的生理病理功能。iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术是由AB SCIEX公司研发的一种体外同位素标记的相对与绝对定量技术,该试剂标记在多肽N末端或赖氨酸侧链基团,可一次性标记8种样本。TMT是由Thermo公司研发的同位素标记试剂盒,标记原理跟iTRAQ类似,但一次性可标记10个样本。肽段标记混合后,利用液质联用Orbitrap质谱仪Thermo Lumos ETD(50万分辨率,目前世界最高)/Thermo HF-X(24万分辨率)对蛋白质同时进行定性和定量分析,数据的优劣跟质谱性能的先进性密切相关。 iTRAQ和TMT技术应用范围几乎涵盖所有学科,只要涉及蛋白质均可,例如细胞、组织、血液、唾液、植物、腹水、脑脊液等等。定量蛋白质组学的一般流程为:样本蛋白质提取---蛋白质纯化---蛋白质定量(100ug标记量)---蛋白质还原烷基化---蛋白质酶解----iTRAQ/TMT标记---样本混合冻干---LC-MS/MS质谱鉴定---生物信息学分析(GO、KGEE和String分析)---差异确证(WB、ELISA、PRM)---差异蛋白质功能研究(借助细胞/动物模型,例如过表达蛋白质或者小分子干扰蛋白质研究差异蛋白的功能)。 本中心作为广东省第一家专业的蛋白质组学研究中心,也是广东省蛋白质组学转化医学重点实验室,开展此技术方法已经数年,积累了较为丰富的实践经验,发表文章见附件。本中心协助提供课题实验设计方案,客户只需提供蛋白样本,样品制备及其后续由本中心负责完成。本中心也可提供整体课题执行方案服务,具体可微信详聊LH417826085。
iTRAQ和TMT技术是近年来定量蛋白质组学最常用的高通量筛选技术,可用于筛选样本组之间的差异表达蛋白质,结合生物信息学分析,揭示差异表达蛋白质的生理病理功能。iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术是由AB SCIEX公司研发的一种体外同位素标记的相对与绝对定量技术,该试剂标记在多肽N末端或赖氨酸侧链基团,可一次性标记8种样本。TMT是由Thermo公司研发的同位素标记试剂盒,标记原理跟iTRAQ类似,但一次性可标记10个样本。肽段标记混合后,利用液质联用Orbitrap质谱仪Thermo Lumos ETD(50万分辨率,目前世界最高)/Thermo HF-X(24万分辨率)对蛋白质同时进行定性和定量分析,数据的优劣跟质谱性能的先进性密切相关。
iTRAQ和TMT技术应用范围几乎涵盖所有学科,只要涉及蛋白质均可,例如细胞、组织、血液、唾液、植物、腹水、脑脊液等等。
定量蛋白质组学的一般流程为:
样本蛋白质提取---蛋白质纯化---蛋白质定量(100ug标记量)---蛋白质还原烷基化---蛋白质酶解----iTRAQ/TMT标记---样本混合冻干---LC-MS/MS质谱鉴定---生物信息学分析(GO、KGEE和String分析)---差异确证(WB、ELISA、PRM)---差异蛋白质功能研究(借助细胞/动物模型,例如过表达蛋白质或者小分子干扰蛋白质研究差异蛋白的功能)。
本中心作为广东省第一家专业的蛋白质组学研究中心,也是广东省蛋白质组学转化医学重点实验室,开展此技术方法已经数年,积累了较为丰富的实践经验,发表文章见附件。本中心协助提供课题实验设计方案,客户只需提供蛋白样本,样品制备及其后续由本中心负责完成。本中心也可提供整体课题执行方案服务,具体可微信详聊LH417826085。
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