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DNA甲基化是一种表观遗传修饰,它是由DNA甲基转移酶(DNA methyl-transferase, DNMT)催化S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)作为甲基供体,将胞嘧***转变为5-甲基胞嘧***(mC)的一种反应,在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧***是唯一存在的化学性修饰碱基。DNA甲基化是表观遗传修饰的主要方式,能在不改变DNA序列的前提下,改变遗传表现。一般说来,DNA的甲基化会抑制基因的表达。DNA的甲基化对维持染色体的结构、X染色体的失活、基因印记和肿瘤的发生发展都起着非常重要的作用。 BSP法原理:用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,未发生甲基化的胞嘧***被转化为尿嘧***,而甲基化的胞嘧***不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧***全部转化为胸腺嘧***,zei后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BSP-直接测序方法。如将PCR产物克隆至载体后进行测序,可以提高测序成功率,这种方法称为BSP-克隆测序法。服务内容1. 基因组DNA的Bisulfite转化。2. DNA甲基化检测——基于BSP(Bisulfite sequencing PCR)法。3.本公司所用试剂全为进口试剂,实验全程质量保证。样品要求 细胞(≥106 个)、组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等样品材料,基因组DNA(体积≥50μl,浓度≥50 ng/μl)。 终产品BSP-直接测序方法:Bisulfite处理的基因组DNA;测序峰图及实验报告。BSP-克隆测序方法:Bisulfite处理的基因组DNA;阳性克隆质粒;测序峰图及实验报告。服务周期BSP-直接测序方法:1~2周BSP-克隆测序方法:2~4周服务说明关于引物 在基于Bisulfite 转化的DNA甲基化检测的方法中,引物是实验成功的关键因素,且因检测的目的基因片段的不同,合适引物的存在与否有较大的不确定性,请尽量采用经过验证的引物,如需DNA甲基化检测引物设计服务,价格另议。
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