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免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(Western blotting),它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。
1.蛋白质抽提
2.蛋白质定量
3.SDS-PAGE电泳
4.蛋白质转移到***纤维膜或PVDF膜
5.膜的封闭和抗体孵育
6.结果检测及数据分析
A:实验的试剂耗材、仪器设备一份;
B: 详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据。
1.实验对象为组织样品,取适量(250-500mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂),匀浆后抽提总蛋白(或核蛋白);实验对象为细胞样品,每份样品取1×106-1×107细胞,PBS清洗细胞,去PBS,加0.1ml-1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂)抽提总蛋白(或核蛋白)。
2.希望客户能提供相应的背景材料以利实验顺利完成,背景材料包括:样本描述,目的蛋白相关资料,必要的相关实验设计内容如阳性对照等等。
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