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慢病毒系统可非常高效地把基因转染到活体模式生物和几乎所有的哺乳动物细胞中,包括不分化的细胞。不分化细胞处于不活跃或者停止生长的状态,非常难转染,例如神经元细胞、原代细胞、干细胞。慢病毒载体的转染效率接近100%,是理想的表达载体系统。 CRISPR- Cas9体系是由sgRNA和 Cas9核酸酶构成的DNA靶向识别剪切复合体。sgRNA识别一段20bp、3端紧接着5'-N-G-G-3' PAM位点的DNA靶序列,Cas9核酸酶在该靶序列上生成DNA双链断裂。DNA双链断裂会被细胞的非同源末端连接或 同源重组机制修复。NHEJ机制容易在修复的断裂位点引入插入/缺失突变,造成阅读框移码而产生基因敲除的效果。 GeneCopoeia提供Cas9核酸酶及sgRNA慢病毒表达克隆。
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