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目前常用的杆状病毒表达载体有AcMNPV和BmNPV两种,我们选用的家蚕杆状病毒表达系统(BmNPV)是基于家蚕体内系统非常适合大规模制备外源蛋白,并且成本较低、方便、高效,而且翻译后加工也与天然蛋白极其相似。我们结合杆状病毒的转染与表达特性,以家蚕幼虫和蛹为宿主大量表达外源蛋白,为您提供快速,满意的蛋白表达服务。
服务内容
服务步骤
主要内容
交付内容
交付时间
目的基因全基因合成
1. 从GenBank中寻找目的蛋白的cDNA序列。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子及mRNA二级结构的优化。
3. 合成设计好的基因序列。
目的基因(连接在T载体或其它常规克隆载体上)及测序报告。
2周
目的基因亚克隆到pFastBac供体质粒
1. 培养并抽提含有目的基因的载体质粒。
2. 将目的基因亚克隆到pFastBac供体载体上。
3. 测序验证构建质粒的准确性。
4. 通过中抽获得重组的质粒DNA。
正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
2-3周
制备重组杆状病毒Bacmid DNA
1. 将重组的pFastBac供体质粒转化到大肠杆菌DH10Bac感受态菌株中。
2. 通过抗生素平板筛选出含有重组Bacmid的菌株。
3. 抽提质粒获得重组的杆状病毒Bacmid DNA。
重组杆状病毒Bacmid DNA,含重组质粒的DH10Bac菌株
转染昆虫细胞Sf-9
1. 利用转染试剂将重组Bacmid质粒转入昆虫细胞Sf-9。
2. 收集成熟的重组杆状病毒并检测病毒的滴度。3. 通过多次感染提高病毒的滴度,并扩增病毒数量。
4. 通过SDS-PAGE和Western-blot检测目的蛋白表达情况。
高滴度重组杆状病毒,病毒滴度及蛋白表达检测结果(如果转染不成功,则不收取费用。如果没有检测到目的蛋白表达,则只收取50%实验费用)。
3周
目的蛋白表达及纯化
1. 培养500ml昆虫细胞至对数期,然后加入适量病毒感染细胞并表达目的蛋白。
2. 收集含有目的蛋白的部分(细胞或培养上清)。
3. 通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制zei终产品质量。
5. 通过Western-blot验证目的蛋白正确性。
6. 可提供表达细胞株:Sf-9,Sf-9 Mimic,High Five。
纯化好的目的蛋白0.1~2mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签(Tag)或切除纯化标签(Tag)的zei终蛋白,纯度可达80%以上。
目的蛋白的再加工及详细检测
1. 内毒素去除,除菌,冻干等进一步加工。
2. 通过HPLC,质谱等方法详细检测目的蛋白的质量。
加工后的终产品及相关实验和检测报告。
大规模制备
按照小试工艺放大生产规模,制备客户需要的合格蛋白产品。
合格的目的蛋白及服务报告。
协商
杆状病毒-昆虫蛋白表达及纯化服务,
杆状病毒-昆虫蛋白表达及纯化服务信息由吉满生物科技(上海)有限公司为您提供,如您想了解更多关于杆状病毒-昆虫蛋白表达及纯化服务报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。
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