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采用 Quant-iT PicoGreen dsDNA 试剂盒对 DNA 进行灵敏的荧光定量


双链 DNA 通常通过测定 DNA 溶液在 260 nm 处的吸光度在酶标仪中进行定量。然而,该方法在典型的光吸收酶标仪上只能测量到约250ng/mL。对于涉及小样本的生物应用,如下一代测序和 DNA 扩增产物的定量,需要更敏感的方法。来自Thermo Fisher Scientific 公司QuantiTPicoGreen dsDNA检测试剂盒对 DNA 更特异,比传统光吸收方法的灵敏度高约1000 倍。 如产品手册所述,此实验在微孔板格式中采用单一染料浓度的动态范围从 250 pg/mL 到 1000 ng/mL。

在这里,我们证明了使 用 Molecular Devices 公司 SpectraMax®酶标仪和 Quant-iT PicoGreen 实验,用户可以可靠地测量低至 50 pg/mL 的双链 DNA 浓度。为了最大化实验的灵敏度,需要使用最佳的激发和发射波长。与基于滤光片的酶标仪不同,SpectraMax iD5 多功能酶标仪和其他 SpectraMax 酶标仪中的双单色器允许在酶标仪规定的范围内选择任何波长。确定为实验提供最佳灵敏度和动态范围的激发和发射波长是很重要的,因为这些波长可能与基于滤光片的酶标仪使用的波长以及试剂盒手册中推荐的波长有所不同。



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