大肠杆菌培养

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使用牛肉膏蛋白胨培养基

组成成分：牛肉膏 3g,蛋白胨 10g,Nacl 5g,琼脂 15～20g,水1000mL,PH7.4～7.6。

具体配置步骤：

1.称药品 按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中. 牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯; 也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离, 立即取出纸片.蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速.

2.加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热, 并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量. 若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中, 再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出, 最后补足所失的水分.

3. 调pH 检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测, 直至达到所需pH范围.若偏碱,则用lmol/L HCl进行调节.pH的调节通常放在加琼脂之前. 应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度.

4.过滤 液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤, 以利培养的观察.但是供一般使用的培养基,这步可省略.

5.分装 按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内. 分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染.

分装量:固体培养基约为试管高度的l/5,灭菌后制成斜面. 分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜. 半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.

6.加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞. 棉塞的形状,大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙, 才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用.要使棉塞总长约3/ 5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落. 有些微生物需要更好的通气,则可用8层纱布制成通气塞. 有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞.

7.包扎 加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸, 以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞.若培养基分装于试管中, 则应以5支或7支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好. 然后用记号笔注明,培养基名称,组别,日期.

8.灭菌 将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min. 如因特殊情况不能及时灭菌,则应故人冰箱内暂存.

9.无菌检查 将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h, 无菌生长即可使用,或贮存于冰箱或清洁的橱内,备用.

大肠杆菌的培养：

37摄氏度，恒温培养48到72小时， 因为接种时和具体培养条件的不同， 其生长一般都在2天外才能长出明显的菌落。

菌落特征：乳白色，圆形，菌落边缘整齐，表面光滑， 表面和背面颜色一致。