抗击新冠中医药表现突出，使用SPEX组织研磨仪鉴定中药材银柴胡

    25日零时起，湖北省除武汉市以外地区解除离鄂通道管控，国内“抗疫”成果显著。本以为国内的疫情得到有效控制，我们就可以松一口气了，但国外患者数不断创新高。截至3月24日，全球已突破40万例，海外新增较前日增长15.18%，国外疫情不断升级，再次让我们见识了“新冠”病毒的厉害。

• 数据来自丁香园

    2020年东京奥运圣会被推迟，美股一周内4次熔断，全球30多个国家封城甚至封国，世界各国正在经受前所未有的考验。而中国国内新增“新冠”确诊病例连续多日0增长，援鄂医疗队撤离，疫情重灾区武汉不断传出好消息，被按下暂停键的湖北也正在重启。中国的“抗疫”成果得到了全球各界的认可，其中一个重要的亮点引起了社会各界的重视。

    “社会各界认为，中医药发挥了重要作用，成为这次疫情防控的一大亮点。”中央指导组成员、卫生健康委党组成员、中医药局党组书记余艳红介绍，全国新冠肺炎确诊病例中，有74187人使用了中医药，占91.5%，其中湖北省有61449人使用了中医药，占90.6%。

    “集中隔离，普遍服中药，是阻止疫情蔓延的基础。”中国工程院院士、天津中医药大学校长张伯礼介绍，数据显示，2月初“四类人员”当中诊断确诊比例是超过80%，中旬就降到了30%，到2月底下降到了百分之十以内。

    可以说中医药在此次抗击“新冠“的战役中，起到了至关重要的作用，具体内容，请大家查看文章：论中医药在“新冠”防止中的作用及效果。

    我们今天的主角“银柴胡”是中医药中清肺的常用中药材。银柴胡的功效是清虚热、除疳热，银柴胡的作用是治阴虚发热、骨蒸劳热、小儿疳积发热，银柴胡用药禁忌是外感风寒及血虚。（具体用药，请遵照医生遗嘱，使用专业医师开具的药方）

    银柴胡作为在临床及中成药生产中应用广泛的中药材, 部分混伪品流入市场, 直接影响着相关中药的质量及临床用药安全。由于受鉴定人员经验、种质资源、药材采收时期等因素影响, 利用传统生药鉴定的方法已经难以满足银柴胡真伪鉴定的需求。

    中文核心期刊《药学学报》2019年05期中，一篇来自宁夏中药材开发与利用工程技术研究中心李军等人：“中药材银柴胡及其混伪品的DNA条形码鉴定研究”的文中，选取4种候选条形码序列ITS、psbA-trnH、rbcL 和matK, 以PCR扩增和测序成功率、遗传距离、变异率、Barcoding gap 及进化树等为指标, 分析其对银柴胡及其混伪品的鉴别情况。

    文中使用筛选合适的DNA条形码序列,以建立基于DNA条形码技术的银柴胡及其混伪品鉴定方法。该研究团队共收集了60份银柴胡及其混伪品，进行DNA提取：取经鉴定的银柴胡及其混伪品基原植物样品30 mg, 干燥药材去除表皮取中间部分50 mg,加入GP1 缓冲液和钢珠2 枚, 经高通量组织研磨机（美国SPEX公司 Geno 2010）研磨4 或6 min 后, 采用DNA 提取试剂盒提取总DNA,详细操作参照试剂盒说明书。

    SPEX 高通量组织研磨仪，可一批次处理6块深孔板，共576个样品，可进行干磨、湿磨、低温研磨，可快速粉碎样品，并保障样品完整性，对研磨中药材非常有效，是中药材研究的利器。

    而后对4种DNA条形码序列ITS、psb A-trn H、rbc L和mat K进行PCR扩增和测序,计算各序列PCR扩增和测序成功率;利用MEGA7.0分析序列特征、计算遗传距离,并构建Neighbour-joining (NJ)系统进化树;利用种间种内变异分析做Barcoding gap图;运用BLAST方法计算各序列鉴定成功率,通过以上指标综合评价不同序列的鉴别能力。

    结果显示, ITS序列的PCR扩增及测序成功率最高,为95.2%, matK最低,为75%; 4种序列的长度范围为211～797 bp, ITS的GC含量在各序列中最高,为54.35%; matK和ITS的鉴定成功率较高,分别为92%和90%; Barcoding gap图显示ITS有明显的间隔区, rbc L、mat K和psb A-trn H序列间隔区不明显或种间种内变异有部分重叠; NJ系统进化树显示, ITS可将银柴胡聚为一支,同属混伪品二柱繁缕与银柴胡明显分为不同支, rbc L和mat K不能把混伪品二柱繁缕分开。因此, ITS序列可作为银柴胡及其混伪品鉴定的优选条形码序列,为银柴胡的真伪鉴定提供科学依据。

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