使用QuickDrop分光光度计进行核酸定量和分析

简介 

分光光度测定法是一项定量和分析生物成 分的成熟技术。其中，核酸是生物实验室 最常检测的生物成分之一。确定这些样品 的浓度和纯度对许多下游实验至关重要， 例如PCR、qPCR测序和DNA基因芯片。 核酸主要吸收260nm下的紫外光，其浓度 可以应用比尔-朗伯特定律通过它们的相关 消光系数和样品光程计算出来。首先， 260nm的紫外光直接照射样品，并且穿过 样品，而另一边的光电检测器则测定有多 少光被吸收。通过对照参比(一般是样品稀 释液)，可以定量样品中的核酸浓度。 样品纯度是核苷酸定量的一个重要指标。 尽管不是确定纯度最准确的方法， A260/A280和A260/A230依然可以用来粗 略估计蛋白和化学成分的污染程度。 SpectraMax® QuickDrop™分光光度计是 一款多用途的紫外-可见(UV-Vis)超微量分 光光度计，尤其是在分析核酸样品方面。 它包含一个0.5 mm超微量上样孔、比色皿 插槽和内置的LCD触摸屏，使用者可以在 这一个系统上进行多种实验。 在这一应用指南中，我们展示了QuickDrop分光光度计是如何以高准确度和高一 致性来定量(浓度)和定性(样品纯度)分析核 酸样品的。

材料和方法 

• QuickDrop 紫外-可见分光光度计 (Molecular Devices cat. #QUICKDROP) • UltraPure™ 小牛胸腺DNA溶液 (Thermo Fisher cat. #15633019) • RNA Control 250 (Thermo Fisher cat. #AM7155) • 10 mm 远紫外石英比色皿 (Starna Cells cat. #9-Q-10) 

样品交叉污染 

样品交叉污染通过使用超微量上样孔交替 检测小牛胸腺DNA和超纯水进行评价。超 纯水作为参比。超微量孔在每次读数完成 后用不起毛的纸擦拭干净。

标准曲线的线性 

溶于超纯水中起始浓度为2500 ng/µL的双 链DNA(dsDNA)经两倍系列稀释。超纯水 作为空白，每个样品浓度都在0.5-mm超 微量上样孔中读3次。利用预设好的DNA 定量方法，从230nm到320nm波长下检测 器吸光度值。DNA定量法自动计算出 dsDNA浓度，基于计算方程及以下260nm 和320nm分别检测出的吸光度值。

材料和方法