用 cAMP-Gs HiRange HTRF 法检测 GPCR 活性

HTRF® 是由 Cisbio 开发的用于检测生物分子相互作用的通用技术。它将荧光共振能量转移 (FRET) 技术与荧光的时间分辨(TR) 测量相结合，可以消除短寿命的背景荧光。该测定使用供体和受体荧光团，它们用于标记要研究其结合的蛋白质或其他生物分子。 当两个生物分子相互结合时，供体和受体就靠在一起了。能量源 ( 例如闪光灯 ) 对供体的激发触发能量转移到受体，受体继而在给定波长发射特定荧光。

HTRF 使 用四种特定的荧光团，它们可以组合形成相容的供体 - 受体 TR-FRET 对。 供体是穴状铕 (Eu3+) 和铽穴状化合物(Lumi4 ™ -Tb)，它们的长寿命荧光使其可用于时间分辨荧光分析。已经开发了两种受体用于 HTRF 分析，XL665 和 d2。两者的激发光谱都与 HTRF 供体的发射光谱重叠，在 665 nm处的发射峰落在供体不显著发射的区域内。最初的 HTRF 受体 XL665 是一种从红藻中纯化的藻胆蛋白色素。 第二代受体d2 是改良的别藻蓝蛋白，比 XL665 小 100 倍，旨在缓解基于XL665 的检测可能出现的空间位阻问题。