【应用文章下载】如何在 SpectraMax iD5 和 i3x 微孔读板 机上优化 Transcreener TR-FRET 检测

Transcreener® HTS 是一种通用的，高通量的生化测定平台，该测定法是基于核苷酸 (ADP) 的检测，核苷酸可由数千种激酶催化形成，其中很多激酶的催化共价调节反应对细胞的信号传导至关重要，并作为靶标在药物发现中具有重要价值。Transcreener®TR-FRET 测定法是一步竞争 性免疫测定法，可直接检测带有远红荧光标记的核苷酸的荧光信号。该测定法是基于时间分辨荧光的共振能量转移 (TR-FRET) 的原理。该测定体系中使用的是与高特异性单克隆抗体 - 淬灭剂偶合物结合的远红示踪剂，在紫外范围 ( 约 330 nm ) 激发铽 (Tb)配 合 物 会导致 其能 量转 移到示 踪 剂，并 在 更高的 波长 (665nm) 产生发射光。目标酶产生的二磷酸或单磷酸核苷酸置换了与 抗 体 链 接 的 示 踪 剂，导 致 TR-FRET 降 低 ( 图 1)。使 用红色示踪剂可最大程度地减少荧光化合物和光散射的干扰。Transcreener TR-FRET 测定法 是专为 HTS 设 计的，采用一步添加，混合和读取的测定模式。