NovoCyte 检测免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤效应

肿瘤免疫治疗是应用免疫学原理和方法，提高肿瘤细胞的免疫原性和对效应细胞杀伤的敏感性，激发和增强机体抗肿瘤免疫应答，并应用免疫细胞和效应分子输注宿主体内，协同机体免疫系统杀伤肿瘤、抑制肿瘤生长，从而达到治疗疾病的目的。免疫治疗是目前肿瘤领域的研发热点，因其在某些肿瘤疾病上卓越的疗效和创新性，被《科学》杂志评为 2013 年最重要的科学突破。临床上将免疫治疗与手术、放疗、化疗和靶向治疗有机地结 合起来，是今后肿瘤治疗发展的趋势。

细胞治疗是免疫治疗方法中的一种，主要基于免疫细胞的细胞杀伤作用。具有细胞杀伤作用的免疫细胞，包括 CTL（Cytotoxic T Lymphocyte）细胞、NK（Natural Killer）细胞、LAK（Lymphokine Activated Killer）细胞、NKT（Natural Killer T）细胞等。细胞杀伤作用分以下三种：① NK 细胞介导的细胞杀伤作用：NK 细胞对靶细胞的直接杀伤，不需要抗原致敏，无特异性；②抗体依赖性细胞介导的细胞杀伤作用（ADCC）：效应细胞表面具有 IgG 的 Fc 受体，当靶细胞表面结合有特异性抗体时，其 Fc 段能与效应细胞表面的 Fc 受体结合，从而触发对靶细胞的杀伤或破坏 ; ③ CTL 介导的细胞杀伤作用：细胞毒性 T 淋巴细胞（CD8⁺ T）通过释放穿孔素、颗粒酶等对靶细胞的直接杀伤作用。

检测细胞杀伤作用的方法主要有 51Cr- 释放法（51Crrelease assay）、酶联免疫斑点法（ELISpot assay）和流式细胞术。51Cr- 释放法是一种比较经典的方法，常作为细胞杀伤作用检测的金标准，但是不能在单细胞水平上检测，敏感度低，某些肿瘤细胞很难标记，标记后细胞自发释放率较高和辐射危害，给试验者带来诸多不便；酶联免疫斑点法检测的是经抗原活化后细胞分泌的细胞因子，虽具有较高敏感性、单细胞水平检测等优点，但存在仅检测胞外分泌的细胞因子和单参数分析的局限性。流式细胞术避免了放射性试剂的应用，具有简单、方便、高敏感性、单细胞水平分析和多参数选择的特点，通常用 CFSE、DiOC18、CTO 等细胞示踪染料标记效应细胞或靶细胞、选择性地结合效应细胞和 / 或靶细胞膜表面特异性标记，利用 PI 或 7-AAD 染料区分靶细胞的死活，在单细胞水平上检测细胞杀伤作用。本文使 用 ACEA NovoCyteTM系列流式细胞仪，选用 CFSE/7- AAD 法，检测 NK 细胞及双特异性单链抗体 BiTE（Bispecific T-cell Engagers）介导的 T 细胞杀伤作用。

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