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    采用新型 HILIC 色谱柱实现快速 N 连接糖基化分析

    发布时间: 2018-11-28 11:21 来源: 安捷伦科技(中国)有限公司

    下载地址: 采用新型 HILIC 色谱柱实现快速 N 连接糖基化分析


    重组单克隆抗体治疗药物 (mAb) 是最大的一组治疗性蛋白药物。此类治疗性药物的有效 性高度依赖于 mAb 正确的糖基化模式,且迄今为止,所有批准的治疗性 mAb 均为免疫 球蛋白 G (IgG) [1]。人类 IgG 的每个重链上均含有一个保守的 N 连接糖基化位点 [2]。 N 连接糖基化是一种极为重要且非常复杂的翻译后修饰,需要在糖蛋白药物开发、加工 和生产的每个阶段对其进行控制、监测与了解 [3]。此外,治疗性蛋白的安全性、有效性 和血清半衰期等特性也会因糖基化模式的不同而受到影响。因此,糖基化模式分析是表 征治疗性糖蛋白(尤其是 mAb)的一个重要部分。 虽然已有多种不同的方法用于糖基化分析。但是,大部分的方法均基于酶解蛋白,从 mAb 中释放多糖,然后通过标记试剂(例如 2-氨基苯甲酰胺,2-AB)进行进一步的衍生 化 [4]。由于糖基缺少发色团,所以荧光检测前需先采用 2-AB(中性)标签标记。而由 于标记后的多糖结构极为亲水,因此将亲水相互作用色谱(通常称为 HILIC)作为首选的 分离技术。采用配合荧光检测的 HILIC 分离是一种非常稳健的糖基化分析方法,同时 HILIC/LC 还可与质谱联用,以获得重要的质量及结构信息。

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