采用新型 HILIC 色谱柱实现快速 N 连接糖基化分析

样品：

人类 IgG N 连接糖链样品

项目：

糖基化分析

重组单克隆抗体治疗药物 (mAb) 是最大的一组治疗性蛋白药物。此类治疗性药物的有效 性高度依赖于 mAb 正确的糖基化模式，且迄今为止，所有批准的治疗性 mAb 均为免疫 球蛋白 G (IgG) [1]。人类 IgG 的每个重链上均含有一个保守的 N 连接糖基化位点 [2]。 N 连接糖基化是一种极为重要且非常复杂的翻译后修饰，需要在糖蛋白药物开发、加工 和生产的每个阶段对其进行控制、监测与了解 [3]。此外，治疗性蛋白的安全性、有效性 和血清半衰期等特性也会因糖基化模式的不同而受到影响。因此，糖基化模式分析是表 征治疗性糖蛋白（尤其是 mAb）的一个重要部分。 虽然已有多种不同的方法用于糖基化分析。但是，大部分的方法均基于酶解蛋白，从 mAb 中释放多糖，然后通过标记试剂（例如 2-氨基苯甲酰胺，2-AB）进行进一步的衍生 化 [4]。由于糖基缺少发色团，所以荧光检测前需先采用 2-AB（中性）标签标记。而由 于标记后的多糖结构极为亲水，因此将亲水相互作用色谱（通常称为 HILIC）作为首选的 分离技术。采用配合荧光检测的 HILIC 分离是一种非常稳健的糖基化分析方法，同时 HILIC/LC 还可与质谱联用，以获得重要的质量及结构信息。

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