测定血清纯化所得的抗体药物偶联物的药物/抗体比率——应用自动亲和纯化、LC/MS 分析和新型 DAR 计算软件
发布时间:
2018-11-28 11:21
来源:
安捷伦科技(中国)有限公司
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测定血清纯化所得的抗体药物偶联物的药物/抗体比率——应用自动亲和纯化、LC/MS 分析和新型 DAR 计算软件 |
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抗体药物偶联物 (ADC) 是一类新兴生物治疗药物,旨在通过将药物与单克隆抗体相连实现靶 向给药。与小分子药物不同,ADC 不是单分子实体,而是一类异质性的抗体,每种抗体所携 带的药物数量以及经历的翻译后修饰都各不相同。药物/抗体比率 (DAR) 是指 ADC 偶联的药 物的平均数量。DAR 是 ADC 开发过程中需要优化和密切监测的关键质量属性,因为它将影 响疗效和毒性1,2。 由于药物的释放,在血液循环中 ADC 的 DAR 将随时间发生变化1,3。因此,制定一套测定药 代动力学 (PK) 研究样品中 ADC DAR 的稳定解决方案非常关键。要确定 ADC DAR,首先必 须纯化血清中的 ADC,然后使用 LC/MS 对其进行分析。通常该工作流程中的样品前处理和 数据分析环节需耗费大量人力,因此易受变异性和人为误差影响。 本应用简报介绍了一种用于测定血清样品中 ADC DAR 的解决方案,该方案采用 Agilent AssayMAP Bravo 平台对 ADC 进行自动亲和纯化;将 Agilent 1290 Infinity UHPLC 与 Agilent 6550 Q-TOF 质谱仪联用,用于采集准确的完整蛋白分子量数据;并利用 Agilent MassHunter BioConfirm 和 DAR 计算器软件确定 ADC 质量和 DAR。该工作流程可节省人 力、降低变异性以及减少产生与 ADC DAR 测定相关的人为误差的可能性,而且仅需很少的 工作量即可扩展样品处理量。
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