提高 PTM 分析中肽谱分离的质量

样品：

单克隆抗体 (mAb)

项目：

PTM 分析

单克隆抗体 (mAb) 等蛋白质的翻译后修饰 (PTM) 是确定药品有效性和安全 性的关键质量属性 (CQA)。分析技术的进步加快了 PTM 表征这项艰巨任务 的速度。在生物制药行业，肽谱分析是蛋白质鉴定的常用方法。其中包括 通过酶解生成肽片段，然后进行液相色谱 (LC) 分离、检测和肽段鉴定。肽 谱分析与质谱 (MS) 检测联用，可鉴定单个氨基酸变化和 PTM。LC/MS 是 PTM 分析的首选技术。但由于蛋白质酶解物较为复杂，肽谱分离始终是一 项具有挑战性的工作。高分离度和可靠的肽谱分离是可靠鉴定 PTM 的关 键。目前的 LC/MS 方法中，采用质谱兼容的甲酸 (FA) 离子对试剂法，信号 强度要优于其他改性剂。但 FA 的缺点是，与多种 C18 固定相配合使用时峰 形较宽并会出现拖尾峰，从而导致肽对发生共洗脱。表征 PTM 时，需要对 复杂的胰蛋白酶酶解物中经过修饰和未经修饰的肽进行高分离度液相色谱 分离。肽保留和 MS 信号分别会受到所选反相液相色谱柱和流动相离子对试 剂的影响。因此，选择正确的液相色谱柱对于提高含 PTM 肽的分离度至关 重要。

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