使用 LC-MSD 对 ADC 药物中的游离小 分子毒素进行定量分析

摘要

本文介绍了利用 Agilent 1290 Infinity Ⅱ 超高效液相色谱 (UHPLC) 系统和 Agilent 6125C  单四极杆质谱检测器对 ADC 药物中游离的小分子毒素 MMAE 和 vc-MMAE 进行定量的两 种分析方法。方法一无需进行复杂的样品前处理，其采用 Agilent PLRP-S 色谱柱 (2.1 × 50 mm, 5 μm, 1000 Å) 并以含 0.1% 甲酸的乙腈和含 0.1% 甲酸的水溶液作为流动相，用 梯度洗脱方法在 20 分钟内分离游离小分子 MMAE、vc-MMAE 和蛋白等基质，然后通过 阀切换将目标分析物切入质谱进行检测，并将基质切入废液，操作方便，具有良好的线 性、精密度和准确度。方法二在样品经过有机溶剂沉淀去除蛋白基质后，用 Poroshell  120 SB-C8 色谱柱 (3.0 × 50 mm, 2.7 μm) 分离 MMAE 和 vc-MMAE，其同样具有良好的线 性、精密度和准确度，且与方法一相比，具有更高的灵敏度。这两种分析方法为生物制 药企业监测抗体偶联药物中的游离小分子 MMAE 和 vc-MMAE 提供了可选的解决方案。

前言 

抗体偶联药物 (antibody-drug conjugate, ADC) 由小分子毒 素药物与单克隆抗体通过连接子偶联形成。其利用单克隆抗 体的靶向性，特异性地识别肿瘤细胞，然后经过细胞的内吞 进入细胞内部，在细胞内蛋白酶的作用下释放出小分子毒 素，杀死肿瘤细胞，具有高靶向性、高药效等优点[1]。MMAE （Monomethylauristatine，单甲基奥瑞他汀 E）是一种常用的小分 子毒素[2]。在 ADC 药物设计中，将马来酰亚胺和 MMAE 连接形成 马来酰亚胺-vc-MMAE（以下简称为“vc-MMAE”），再将其连接 至抗体，最后将多余的 MMAE 和 vc-MMAE 除去。但是，少量游 离 MMAE 和 vc-MMAE 仍有可能残留在产品中。此外，已经偶联 的小分子毒素在药物存放过程中可能会从 ADC 上脱落。而游离小 分子毒素无靶向性，且毒性高，会影响 ADC 药物的安全性[3]。因 此，监测 ADC 药物中的游离小分子毒素的含量非常重要。 在本应用中，使用 Agilent 1290 Infinity Ⅱ 超高效液相色谱 (UHPLC) 系统和 Agilent 6125C 单四极杆质谱检测器，为 ADC 药 物中游离的小分子毒素 MMAE 和 vc-MMAE 定量提供了两种分析 方法。方法一采用含 0.1% 甲酸的乙腈和含 0.1% 甲酸的水溶液作 为流动相，使用 PLRP-S 色谱柱 (2.1 × 50 mm, 5 μm, 1000 Å)，样 品不需要复杂的前处理过程，以梯度方法在 20 分钟内对游离小 分子 MMAE、vc-MMAE 和基质进行分离。通过阀切换将目标物 质切入质谱进行检测，将基质切入废液。该方法操作方便、具有 良好的线性关系、精密度和准确度。采用方法二时，样品经有机 溶剂沉淀的方式去除基质后，使用 Poroshell 120 SB-C8 色谱柱 (3.0 × 50 mm, 2.7 μm) 对 MMAE 和 vc-MMAE 进行分离，该方法 具有良好的线性关系、精密度和准确度。与方法一相比，方法二 虽有简单的前处理过程，但该法具有更高的灵敏度。本应用为生 物制药企监测 ADC 药物中游离的小分子 MMAE 和 vc-MMAE 提供 了可选的解决方案。

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