新国标扩项—米酵菌酸分析方法

我司已经建立凉皮样品中米酵菌酸的分析方法,根据客户的要求，美正生物开发建立银耳样品中米酵菌酸的分析方法。

01实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

PerkinElmer QSight 液相色谱串联质谱仪。

试剂材料

甲醇、甲酸、乙腈为色谱纯，氨水为分析纯；

甲醇-氨水溶液：量取 800 mL 甲醇，加入 10 mL 氨水，用水稀释并定容至 1000 mL，混匀；

2%甲酸甲醇溶液：吸取 2 mL 甲酸，用甲醇稀释至 100 mL ，混匀；

0. 1%甲酸水溶液：吸取 1 mL 甲酸，用水稀释至 100 mL ，混匀；

50%乙腈水溶液：吸取 50 mL 乙腈，用水稀释至 100 mL ，混匀；

PolyPlus MAX：60 mg/3 mL，P/N：CSS0025。

样本制备

样品提取

称取银耳试样 2.5 g 置于 50 mL 离心管中，加入 15 mL  甲醇-氨水溶液，涡旋混匀，室温下 置于暗处浸泡 1 h，超声提取 30 min，8000 r/min 离心 5 min，取上清液至 25 mL 刻度离心管中， 残渣加入 10 mL 甲醇-氨水溶液重复提取一次，合并提取液，用甲醇-氨水溶液定容至 25 mL ， 混匀，准确移取 5 mL 上清液（若有少许沉淀可离心后再取上清，否则会影响净化时过柱速度），

待净化。

样品净化

将待净化液全部转移到经 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化平衡的固相萃取柱中，依次用 5 mL 水 和 5 mL 甲醇淋洗，弃去流出液，抽干萃取柱，再用 6 mL 2%甲酸甲醇溶液洗脱，收集洗脱液， 于 40℃水浴中氮吹至干，准确加入 1 mL 50%乙腈水溶液，涡旋混匀，经有机 PTFE 针式滤器

过滤后进行 LC-MS/MS 分析。

基质混合标准工作溶液配制

取高浓度米酵菌酸标准溶液，用空白样品基质溶液稀释成 15 ng/mL 、30 ng/mL 和 125ng/mL 的基质混合标准工作溶液。

色谱条件

色谱柱：Kinetex F5 ，2.6 µm ，3.0 × 50 mm；

流动相 A：0. 1%甲酸水；

流动相 B：乙腈；

柱  温：40℃;

进样量：10 µL；

梯度洗脱：

液相色谱梯度洗脱条件

质谱条件

离子源：ESI- ；雾化气：200；电喷雾电压：-4500 V；离子源温度：275℃; 反吹气：80；

质谱接口温度：280℃; 采集方式：多反应监测(MRM)。

质谱参数

注：本实验中所有离子对都以第一组离子对作为定量离子对。

02实验结果

 银耳基质加标回收实验结果（n=3）

03实验谱图

15 ng/mL 米酵菌酸标准工作溶液色谱图

15 ng/mL 米酵菌酸银耳基质混合标准工作溶液色谱图

银耳基质空白色谱图

0.03 mg/kg 银耳基质加标色谱图

30 ng/mL 米酵菌酸银耳基质混合标准工作溶液色谱图

0.06 mg/kg 银耳基质加标色谱图

125 ng/mL 米酵菌酸银耳基质混合标准工作溶液色谱图

0.25 mg/kg 银耳基质加标色谱图

04结论

本实验参考 GB 5009.189-2023 建立了银耳中米酵菌酸的检测方法，并结合 LC-MS/MS 分别对加标量为0.03mg/kg、0.06mg/kg和0.25mg/kg的银耳样品进行了检测。

结果表明，使用 MAX 固相萃取小柱对银耳基质进行净化，米酵菌酸回收率均满足检测要求且RSD小于10%。说明该方法适用银耳中米酵菌酸的检测，且方法稳定。