细菌电转实验细菌电转实验

一、实验准备
      1.仪器准备：电转仪器、离心机、恒温摇床、恒温培养箱。
      2.耗材试剂准备：电转杯、电转液、枪头、带抗性LB平板、SOC培养基、1.5mL EP管、锥形瓶、待电转质粒。

二、实验流程
      1.大肠杆菌（DH5a）接菌（1:100）到5mL 无抗LB培养基/SOC培养基，摇菌6-8h，直至对数期生长。（OD600：0.7-1.0）
      2.用6600 rpm/min x 5min收集活菌沉淀。
      3.CellEasy电转液重悬，洗两遍。6600 rpm/min x 2min。用1mL电转液重悬细菌，可分装10管，0.1mL/管，备用。 
      4.1ug质粒和0.1mL菌液混匀。电转质粒浓度最好10ug/mL以上。
      5.移取85ul混合液与1mm电转管中，按细菌电转实验参数进行设置（细菌电转：800-1200V，5ms）
      6.电转完毕后，取出电转杯，加入2mL 预冷SOC培养，缓慢重悬，移至新的1.5mL EP管中。
      7.37度恒温摇床，200rpm/min，培养30-45min。
      8.取适量菌液涂板。（可选：瞬离后，移取部分培养基，重悬100-200uL体积重悬菌液，涂布于带有质粒相应抗性的LB平板中）
      9.37度恒温培养箱静止培养过夜。（12-16小时）

细菌电转实验.pdf


 

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