细胞电转实验

一、操作步骤
      1.检测前准备工作
      试剂耗材：细胞培养基DMEM或1640、FBS、0.25%胰蛋白酶 (自配，无菌)、PBS (自配，无菌)、电转缓冲液。
      测试细胞：根据实验分组提前准备好电转需要用到的细胞，每个电转杯需要1*105-1*106个细胞。
      其他准备：用具准备电转仪器、电转杯（1mm）、电转液、毛细管枪头、6孔板、倒置荧光显微镜、移液器。

二、细胞实验流程
      1. 细胞消化，用PBS处理成细胞悬液，计数，离心（1000rpm，5min）弃PBS。
      2.用850ul CellEasy电转液重悬107cells，每个电转杯加入的细胞悬液约85uL，细胞量为：1*106/电转杯。
      3.细胞悬液中加入质粒8.5ug(终浓度10ug/mL），混匀。
      4.毛细管枪头移取85ul到电转杯，从底部加入，保证没有气泡，气泡会影响电转效果。
      5.调好仪器参数，逐个电转，电转结束后迅速加入少量培养基。
      6.六孔板中提前加入2ml完全培养基，电转细胞悬液吸出加入到孔板，37℃培养箱静置培养24-48h，观察荧光蛋白表达，计算电转效率；电转后第2天观察细胞存活率。
      7.依次操作完上述所有样品。
      8.收拾台面，电转杯及时清洗，仪器归位。

细胞电转实验.pdf
   

 

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