CRISPR/Cas9敲除质粒套餐（3靶点/基因+测序报告）

CRISPR/Cas9敲除质粒套餐（3靶点/基因+测序报告）
 

       CRISPR/Cas9敲除质粒用于敲除目的蛋白、miRNA。

CRISPR/Cas9敲除技术

       CRISPR/Cas9敲除技术的原理是Cas9结合到sgRNA上，sgRNA的引导序列与基因组DNA中的靶标序列结合，Cas9切割靶标序列产生双链断裂，迫使细胞进行紧急修复，通常条件下，细胞偏向于使用非同源末端连接(NHEJ:nonhomologous DNA end joining）的方式对断裂的双链进行修复，从而造成靶位点基因的插入或缺失突变，发生移码突变可以完全敲除目标蛋白。
       CRISPR/Cas9基因敲除技术是继TALEN基因敲除技术之后又一大突破，具有操作简便，周期短，敲除效率高，作用靶点多，无基因、细胞及物种限制，目的基因的大小不受限制，不受转录本数量影响等优势，逐渐成为基因敲除的标准操作工具。
 

CRISPR/Cas9敲除载体

pXC9-puro：慢病毒载体，可用于构建稳定细胞株，单质粒系统（能同时表达sgRNA和Cas9），具有Puro抗性基因。
 

pX330-puro：单质粒系统（能同时表达sgRNA和Cas9），具有Puro抗性基因。
 

pX330-copGFP：单质粒系统（能同时表达sgRNA和Cas9），具有copGFP荧光标记基因。
 

CRISPR/Cas9敲除质粒构建流程

提供结果

1. CRISPR/Cas9敲除质粒:20μg，浓度500ng/μL以上，超螺旋率95%以上。
2. 500μL菌液。
3. CRISPR/Cas9敲除质粒的测序图谱、酶切鉴定结果和序列。
4. CRISPR/Cas9敲除质粒构建报告。

 

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