技术服务交流培训

技术服务平台:

广州飞扬生物工程有限公司是一家成立于2004年的高科技公司，美国Omega Biotek核酸纯化公司的中国总代理，主要经营酶制品研发、生产和销售。位于广州科学城国际企业孵化器。目前飞扬已建立起400多平方的分子生物学实验室，拥有高端全面的硬件设备，如SPEX Geno 2000 高通量组织研磨机,Beckman Multimek 96. Thermo Scientific KingFisher Flex全自动磁珠提取纯化系统,Biomek 2000实验室自动化工作平台,测序仪，合成仪，PCR仪，纯水仪等,并建立起整套的分子生物学全自动核酸分离提取纯化分析平台。

为了进一步推进国内核酸分离提取纯化系统的全自动化，以及与广大科研工作者分享分子生物学的相关经验，我们特设以下分子生物学平台。

 内容说明：

凡与本公司有技术服务合作的客户均可获得免费参加服务相关的项目培训的机会。

参加培训者可自行选择指定本公司提供的项目进行理论和实际操作培训

参加培训者可自行提供样本，培训过程实际操作产生的实验样本结果，客户可自行处理

客户参加培训需提前3天以上预约，并缴纳培训中所需的仪器磨损费用和实验指导费用。

技术服务平台：

Thermo Scientific KingFisher Flex全自动磁珠提取纯化系统

应用领域

基因组学
KingFisher磁珠提取纯化平台，非常适合于基因组学的研究。无论提取样本的来源是微生物、动物、植物或是病毒，KingFisher都可以快速的纯化出足够数量的DNA或RNA。高质量的结果可以满足下游应用(如荧光定量PCR)的需要。

畜牧兽医、CDC的应用
使用专门的KingFisher试剂盒，可高效、高灵敏度地提取禽流感病毒(Avian influenza virus)、新城疫病毒(Newcastledisease virus)、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrheavirus)、立克次体(Coxiella burnetii)等。KingFisher结合omega的E-Z 96® Mag-Bind® Viral DNA/RNA Kit病毒RNA提取试剂盒，应用于禽流感病毒的检测，是获得美国农业部(USDA)认可的高通量方法。

食品安全领域的应用
经过特殊处理的Dynal免疫磁珠可以快速的从食品样品、环境中富集致病菌，如沙门氏菌(Salmonella)、李斯特菌(Listeria)、军团菌(Legionella)、大肠杆菌O157(E. coli O157)、贾地鞭毛虫(Giardia cysts)和隐孢子虫(Cryptosporidium oocysts)等。采用磁珠纯化技术可以有效的富集样品中的微生物，减少背景干扰从而提高实验的重复性和准确性，该方法已获美国环保署(EPA)和美国官方分析化学师协会(AOAC)的认可。
食品中O157，沙门氏菌，单增李斯特菌免疫磁珠检测流程（数据来源于上海浦东疾控）

临床样品的分子诊断
KingFisher可快速高通量的处理临床样品，提纯的核酸可用于后续的分子诊断，如使用氟尿嘧啶(Fluorouracil, 5-FU)治疗癌症患者前需检测人DPYP基因突变。KingFisher提供了一种高效、高灵敏度的从患者全血中纯化核酸的方案，为DPYP基因的筛查设定了标准。KingFisher同样适合于福尔马林固定石蜡包埋(Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded, FFPE)的组织样品。

法医学的应用
对于法医工作而言，核酸提取的效率和稳定性都是十分重要的。KingFisher与专门的法医样品核酸提取磁珠试剂配合使用，可从不同来源的材料中纯化高质量的DNA，包括干血、毛发、烟嘴等，最大处理量可达96个样品/每次。

分离特定的细胞
通过标记特殊抗体的磁珠，KingFisher可以用于分离特定的细胞，如CD34、CD3、CD4等。


快速纯化蛋白
即使是脆弱的蛋白复合体KingFisher可用于纯化各种蛋白，从重组蛋白到治疗用抗体，可以使用各种宿主细胞，如动物细胞、昆虫细胞、酵母、细菌或转基因动物/植物等，常规地纯化抗体/抗原、药物和疫苗。特别的，KingFisher技术是最温和的纯化方法，即使常规柱纯化技术难以得到的复杂而精巧的蛋白复合体，也可以通过KingFisher磁珠提取分离技术完整的纯化得到。
 

血清中肽段表达谱研究与生物标志物筛选
基于磁珠的色谱分离技术，可以让你以一种简单、有效和可重复的方式每天处理上百的样品。采用基于疏水相互作用的反相RPC磁珠(Reverse Phase Chromatography)可以从血清样品中结合多肽片段，经乙氰洗脱，即可获得高质量的肽段表达谱。通过比较不同条件下肽段表达图谱的差异，寻找潜在的可能血清生物标志物(Biomarker)。

加速噬菌体展示文库的淘洗进程
与传统基于固相微孔板的技术相比，KingFisher技术的优势在于：提供了悬浮式的磁珠，巨大的比表面积可以进行更有效的淘洗(Panning)；转移样品而非液体的方法，使得清洗过程变得非常的简单。全自动的方法易于提升通量，从而显著提高噬菌体展示技术的效率。

高通量自动化工作站

Biomek 2000实验室自动化工作平台

               Beckman Multimek 96. 自动化工作站

     Beckman Coulter公司是世界上领先的的自动化产品生产厂家，其自动化系列产品，在全世界的基因组研究、蛋白质组研究、药物筛选等领域市场占有率最高。秉承了Beckman Coulter公司的创新、简单化、自动化的理念，为您量身定做适合您自己研究的实验室自动化平台。可以加速您的实验流程，提高试验的通量，节约珍贵的试验样品及试剂。

主要应用于：

　　基因组：各种样品的DNA/RNA提取、质粒提取纯化、PCR反应体系建立及产物纯化、测序反应体系建立及产物纯化等。

   蛋白质组：体外转录/翻译、蛋白质纯化、Aptamer(核酸适配子)筛选、蛋白质结晶、ELISA反应等。

　　药物筛选：药物靶标研究，ADMET（药物的吸收、分布、代谢、排除和毒理特性），ADMET（药物的吸收、分布、代谢、排除和毒理特性）等研究

3     Agilent2100生物芯片分析系统

生物芯片的应用领域

基因表达水平的检测

　　用基因芯片进行的表达水平检测可自动、快速地检测出成千上万个基因的表达情况。谢纳(M.Schena) 等用人外周血淋巴细胞的cDNA文库构建一个代表1046个基因的cDNA微阵列，来检测体外培养的T细胞对热休克反应后不同基因表达的差异，发现有5个基因在处理后存在非常明显的高表达，11个基因中度表达增加和6个基因表达明显抑制。该结果还用荧光素交换标记对照和处理组及RNA印迹方法证实。在HGP完成之后，用于检测在不同生理、病理条件下的人类所有基因表达变化的基因组芯片为期不远了。

基因诊断

　　从正常人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出标准图谱。从病人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出病变图谱。通过比较、分析这两种图谱，就可以得出病变的DNA信息。这种基因芯片诊断技术以其快速、高效、敏感、经济、平行化、自动化等特点，将成为一项现代化诊断新技术。例如Affymetrix公司，把p53基因全长序列和已知突变的探针集成在芯片上，制成p53基因芯片，将在癌症早期诊断中发挥作用。又如，Heller等构建了96个基因的cDNA微阵，用于检测分析风湿性关节炎（RA）相关的基因，以探讨DNA芯片在感染性疾病诊断方面的应用。

药物筛选

　　利用基因芯片分析用药前后机体的不同组织、器官基因表达的差异。如果再cDNA表达文库得到的肽库制作肽芯片，则可以从众多的药物成分中筛选到起作用的部分物质。还有，利用RNA、单链DNA有很大的柔性，能形成复杂的空间结构，更有利与靶分子相结合，可将核酸库中的RNA或单链DNA固定在芯片上，然后与靶蛋白孵育，形成蛋白质-RNA或蛋白质-DNA复合物，可以筛选特异的药物蛋白或核酸，因此芯片技术和RNA库的结合在药物筛选中将得到广泛应用。在寻找HIV药物中，Jellis等用组合化学合成及DNA芯片技术筛选了654536种硫代磷酸八聚核苷酸，并从中确定了具有XXG4XX样结构的抑制物，实验表明，这种筛选物对HIV感染细胞有明显阻断作用。生物芯片技术使得药物筛选，靶基因鉴别和新药测试的速度大大提高，成本大大降低。

个体化医疗

　　临床上，同样药物的剂量对病人甲有效可能对病人乙不起作用，而对病人丙则可能有副作用。在药物疗效与副作用方面，病人的反应差异很大。这主要是由于病人遗传学上存在差异（单核苷酸多态性，SNP），导致对药物产生不同的反应。如果利用基因芯片技术对患者先进行诊断，再开处方，就可对病人实施个体优化治疗。另一方面，在治疗中，很多同种疾病的具体病因是因人而异的，用药也应因人而异。例如乙肝有较多亚型，HBV基因的多个位点如S、P及C基因区易发生变异。若用乙肝病毒基因多态性检测芯片每隔一段时间就检测一次，这对指导用药防止乙肝病毒耐药性很有意义。

测序

　　 　　基因芯片利用固定探针与样品进行分子杂交产生的杂交图谱而排列出待测样品的序列，这种测定方法快速而具有十分诱人的前景。研究人员用含135000个寡核苷酸探针的阵列测定了全长为16.6kb的人线粒体基因组序列，准确率达99%。用含有48000个寡核苷酸的高密度微阵列分析了黑猩猩和人BRCA1基因序列差异，结果发现在外显子约3.4kb长度范围内的核酸序列同源性在98.2%到83.5%之间，提示了二者在进化上的高度相似性。

生物信息学研究

　　人类基因组计划是人类为了认识自己而进行的一项伟大而影响深远的研究计划。目前的问题是面对大量的基因或基因片断序列如何研究其功能，只有知道其功能才能真正体现HGP计划的价值--破译人类基因这部天书。后基因组计划、蛋白组计划、疾病基因组计划等概念就是为实现这一目标而提出的。生物信息学将在其中扮演至关重要的角色。生物芯片技术就是为实现这一环节而建立的，使对个体生物信息进行高速、并行采集和分析成为可能，必将成为未来生物信息学研究中的一个重要信息采集和处理平台，成为基因组信息学研究的主要技术支撑。生物芯片作为生物信息学的主要技术支撑和操作平台，其广阔的发展空间就不言而喻。 　　在实际应用方面，生物芯片技术可广泛应用于疾病诊断和治疗、药物基因组图谱、药物筛选、中药物种鉴定、农作物的优育优选、司法鉴定、食品卫生监督、环境检测、国防等许多领域。它将为人类认识生命的起源、遗传、发育与进化、为人类疾病的诊断、治疗和防治开辟全新的途径，为生物大分子的全新设计和药物开发中先导化合物的快速筛选和药物基因组学研究提供技术支撑平台，这从我国99年3月国家科学技术部刚起草的《医药生物技术“十五”及2015年规划》中便可见一斑：规划所列十五个关键技术项目中，就有八个项目（基因组学技术、重大疾病相关基因的分离和功能研究、基因药物工程、基因治疗技术、生物信息学技术、组合生物合成技术、新型诊断技术、蛋白质组学和生物芯片技术）要使用生物芯片。生物芯片技术被单列作为一个专门项目进行规划。总之，生物芯片技术在医学、生命科学、药业、农业、环境科学等凡与生命活动有关的领域中均具有重大的应用前景。

4.   2010 Geno/Grinder® & Accessories     SPEX Geno 2000 高通量组织研磨系统

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应用领域

植物组织核酸提取
为了从完整种子中分离核酸，需要先用机械粉碎的方法破碎种子，再提取和纯化核酸。通常的机械破碎方法是人工采用研钵和杵进行研磨的方式;但是，这种方法并不适合高通量的种子破碎，因为人工研磨速度很慢而且研钵和杵的重复使用也容易导致交叉污染。用GENO对微孔板中的种子进行机械研磨，可以同时使核酸从大量种子细胞中释放出来；再用传统的分离方法就可以从匀浆液中纯化出核酸。用水浸泡过夜的大豆可在3分钟内高效一致地被均质化，所得浆液可以作为DNA分析的材料来源。

从培养的细胞中快速提取基因组DNA为PCR分析做准备
在科学家的研究和诊断过程中，PCR大大提高了对核酸进行检测和定量测序的效率。但是，因为PCR方法通常需要在模板扩增前有一个纯化步骤，因此这个过程并不快。纯化步骤包括细胞收集和核酸的溶解，接下来还要用层析树脂把核酸从裂解液中分离出来。虽然这些纯化方法已经很大的发展，但是它们仍然需要耗费大量时间；而且，大量重复的试验可能会耗费大量昂贵的材料。
GENO技术能夠一次快速而低成本地破碎大量培养的细胞，从而为后期对基因组DNA进行PCR分析而做准备。用GENO对微孔板中大量的培养细胞进行高通量均质化，再通过层析树脂对核酸进行纯化，并进行PCR分析，能大大提高基因组分析的效率。

酵母的96孔高通量破碎
多年的生物化学、基因组学和分子生物学研究取得的丰富信息表明，酵母已经成为生物系统研究的模式型和生物系统研究的模式生物和生物药学家的有力工具。酵母已成为基因表达研究和蛋白质重组表达的通用宿主，包括Picbia、Hansenula、Debaryomyces均被研究者所使用，但使用最普遍的仍然是Saccbatomyces酵母。
酵母mRNA和细胞内蛋白通常很难用传统的酶解方法从细胞中完整地提取出来。裂解酶中通常含有核糖核酸酶和其他蛋白，它们不仅会攻击细胞壁，而且会攻击特定的分子。並且，由酶解产生的原生质体通常需要借助一定的试剂进行溶解而导致很多蛋白貭变性失活。因此，通常需要采用机械的方式破碎酵母细胞从而释放其内溶物。

機械破碎酵母傳統上採用壓榨機或球磨機。這兩種方法中都是單樣品操作的。对那些需要大量酵母克隆在一個高通量筛選環境中的检测实验來說，單樣品操作是個瓶頸並且是不切實際的。因此，需要一種方法可以高通量的機械分裂細胞。GENO一開始為深孔版中破碎種子而設計的球磨機，現在被用來在微孔版中對酵母進行破碎。

细菌细胞的裂解(嗜盐菌和杆菌)
GENO能通过机械碰撞的方式裂解细菌细胞。以格兰氏阴性耐盐菌Halomonas elongate和格兰氏阳性杆菌为模式研究对象，SPEX已经发展了相应的两种技术:细菌培养，收获并冲洗掉多余的培养基，将细胞悬浮于微孔版中的盐水溶液中，在研磨界质存在的情况下用GENO对细胞进行震荡破碎，6-9分钟就能够释放足够量的核酸，进行后续试验

产能达到一般方法三倍、杜邦方法两倍数量的样品，节省时间人力成本的耗费。

利用GENO/Grinder萃取器来增快残留农药，霜脲氰(Cymoxanil)， 的LC/MS/MS分析之样品处理 
* 一般方法一天八小时只能做八个样品(需20多个步骤处理)
* 用杜邦方法一天八小时可以做十六个样品(涉及10个步骤处理) 
* 但用GENO/Grinder萃取器却可一天八小时轻易做出三十二个样品(只要3个步骤)
* 回收率(SPIKE RECOVERY)和其他QA/QC的效果一致 
* 现已被美国环保署USEPA和食品药物管理局USFDA采用)

Real-Time PCR实时荧光定量平台

应用领域

•  可以对各种基因的表达进行定量分析，如：同一基因在不同组织中的表达差异、同一基因在不同药物处理后的表达差异、转基因食品的检测。过去最常用的高通量筛选基因表达差异的技术是cDNA 芯片和差异显示，但这两种技术的缺点是只能定性而非完整意义上的定量分析。实时PCR 技术和高通道实时PCR 仪的出现，无疑为这种检测提供了极大的方便。

•  可以进行点突变分析和等位基因分析，用不同的荧光报告基团标记Taqman 探针，然后分别与野生型和突变型杂交，如果一种荧光信号明显强于另一种荧光信号，则表明它是纯合子；如果两种荧光信号都明显增强，则表明它是杂合子。另外分子信标（Molecular Beacon ）就是专门为这种技术设计的探针。

•  可以进行单核苷酸多态性的分析，检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义，因分子信标结构的巧妙性，一旦SNP 的序列信息是已知的，采用这种技术进行高通量的SNP 检测将会变得简单而准确。

•  可以进行DNA 甲基化检测，DNA 甲基化同人类的许多疾病有关，特别是癌症，Laird 报道了一种称作Methylight 的技术，在扩增之前先处理DNA ，使得未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影响，用特异性的引物和Taqman 探针来区分甲基化和非甲基化的DNA ，这种方法不仅方便而且灵敏度更高。

•  对传染性疾病进行定量定性分析，这在我国应用比较广泛，大家比较熟悉。许多生产临床PCR 试剂的厂商已经陆续推出了一系列的诊断试剂，如：肝炎系列、性病系列、肿瘤系列等等。

技术服务交流培训信息由OMEGA中国总代理--广州飞扬生物工程有限公司为您提供，如您想了解更多关于技术服务交流培训报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途