引物合成

 

    引物合成在生物领域应用广泛，采用固相亚磷酰胺三酯法可以高效、快速的发生偶联反应，使核酸分子固定在固相载体上完成链的合成。合成的引物适用于全基因合成， 生物芯片， qPCR，NGS等各领域的生物实验。艾基生物现采用先进的，高通量的自动化DNA合成仪，以高质量的原材料配有优化的流程和严谨的质量监控检测来确保引物的质量。同时还可以合成荧光修饰引物， taqman 探针和 siRNA。高质量的引物适用于全基因合成， 生物芯片， qPCR，NGS等各领域的生物实验。

  服务优势  

快速发货：常规引物当日下单，最快次日上午送达；
质控严格：从原料、生产流程到引物质检，各环节严格控制；
流程可靠：成熟的流程，合成准确，兼并碱基分布平均；
多种纯化方式： DSL纯化、PAGE纯化、RPC纯化、HPLC纯化；
多种修饰标记：稀有碱基，修饰基团，荧光基团，生物素种类齐全。

  技术流程  
 

 

 纯化方式介绍及适用范围  
 

 

纯化方式

详细说明

C18柱脱盐

又称为简易反相柱，对DNA有特异性吸附，可被有机溶液洗脱，但不会被水洗脱，因此能有效地去除盐分，但不能有效去除比目的片段短的小片段。该方法一般不会对普通PCR反应产生影响。对于需要用于测序、克隆的引物不能使用这个级别。

RPC纯化

RPC纯化是通过反相净化滤芯 (Reverse Phase Cartridge) 对引物进行纯化，纯化原理与反相HPLC纯化一样。

PAGE纯化

与反相HPLC比较，RPC是一种有效且更加经济的纯化方式。反相净化滤芯通常包含一种疏水基质如 C18的硅胶，能够很好的吸附DNA，并且可以用水轻松地将切割下来的保护基团和短的引物片段从反相柱上洗掉。RPC纯化的引物可以应用于DNA测序、PCR及基因合成等。
PAGE纯化法是使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，对引物DNA进行分离，然后从凝胶中回收目的DNA。PAGE纯化法也是一种非常有效的DNA纯化方法，纯化后的DNA纯度大于90%，对长链Oligo DNA (大于50 mer)的纯化特别有效。

HPLC纯化

HPLC纯化是使用高效液相色谱的原理，对引物DNA进行纯化。该方法用于分离纯化或分析时能达到很高的纯度和灵敏度。在引物DNA的分析和纯化中，常用的有离子交换（ion-exchange）HPLC和反相（reverse-phase）HPLC。reverse phase HPLC：纯度大于90%；ion exchange HPLC：纯度大于95%，可以有效的去除N-1短片段。HPLC纯化主要用于短链和修饰引物的纯化。该法的缺点是成本较高，批量生产效率不高。

                 

表1. 引物纯化主要方式的介绍

 

纯化方式

引物长度

建议

适用范围

<15 mer

15～40 mer

41～59 mer

60～120 mer

RPC

适用*

推荐

适用

不适用

快速、通量大，常用于PCR、测序引物等。

常用于PCR扩增、全基因合成及DNA测序等。

PAGE

不适用

适用

适用

推荐

常规分子生物学实验引物采用RPC纯化或ePAGE纯化即可；但强烈建议长链引物(≥60 mer)选用PAGE纯化。

50 mer以上的未修饰寡核苷酸，用于定点突变、克隆、蛋白结合凝胶迁移电泳分析、治疗与诊断用途。

HPLC
 
 

推荐

适用

适用

不适用

对纯化短链引物(＜15 mer)特别有效，但此法纯化通量小、成本较高。如实验对纯度要求非常高，建议选用HPLC与PAGE双重精制。

● 小于50 mer的未修饰寡核苷酸，用于定点突变、克隆、蛋白结合凝胶迁移电泳分析、治疗用途；
● 带有疏水基团的修饰引物；
● 商业化的诊断引物或探针(80%～95%纯度)。

适用

不适用

不适用

              
表2. 引物纯化主要方式的适用范围及建议

*为了保证您的引物纯度，对于＜5mer的短链引物选择RPC纯化前请先致电咨询
《服务说明》
如果您在邮件中没有标明合成量，我们将默认按 2OD 进行合成。
兼并碱基按照常规引物收费
兼并碱基：
N:(A/G/C/T)       V:(A/C/G)      M:(A/C)
H:(A/C/T)      R:(A/G)
D:(A/G/T)      W:(A/T)
B:(C/G/T)      S:(C/G)
Y:(C/T)          K:(G/T)  


 服务价格  
 

常规引物合成
 

纯化方式引物长度（base）合成规模（nmol）产量（nmol）价格（￥/base）交货时间PAGE纯化4 ～ 145050.9下单后24小时内
 15 ～ 595050.960 ～ 98505询价脱盐纯化4 ～ 145050.715 ～ 595050.760 ～ 98505询价

修饰引物及探针价格
 

(1) 硫代修饰, dI、dU及2'-O-Me-dC修饰

修饰种类

纯化方式

规格（OD）

价格（元）

硫代修饰*

PAGE

2

5

5

6

10

9

50

20

*部分硫代修饰，硫代位点按硫代修饰收费，其他位点按普通DNA碱基收费

(脱氧次黄嘌呤)dI

PAGE

2

60

5

80

10

160

(脱氧尿嘧啶)dU

PAGE

2

80

5

120

10

200

2'-O-Me-dC

PAGE

2

80

5

100

10

240

5-MethyldC

PAGE

2

300

5

350

10

500

如需其它特殊碱基修饰请询价.

 

(2) 磷酸化、氨基、巯基及各种Spacers修饰 （HPLC纯化）

基团类型

修饰

规格（OD）/价格（元）

2 OD

5 OD

10 OD

磷酸基团Phosphorylation

5'-Phosphorylation

250

300

450

3'-Phosphorylation

250

300

500

氨基基团Amine

5'-Amino

150

200

300

3'-Amino

150

200

300

空间子Spacers

Spacer C3

300

350

600

Spacer C9

420

500

600

Spacer C18

420

500

600

巯基基团Thiolation

5'-SH C6

400

500

800

3'-SH C6(3'-SH C3)

400

500

800

3'-diThiol*

800

1000

1500

* 3'-diThiol即DTPA

生物素Biotin

5'- Biotin

220

250

350

3'- Biotin

250

350

500

3'- Biotin TEG

300

450

600

Digoxin

5'- Digoxin

500

700

1000

3'- Digoxin

600

800

1200

 

(3) 荧光修饰（Fluorogenic Modifiers） （HPLC纯化）

基团类型

修饰方式

规格(OD) / 价格(元)

2 OD

5 OD

10 OD

6-FAM

5'- FAM

250

350

600

3'- FAM

250

350

600

6-HEX

5'- HEX

400

500

900

3'- HEX

500

600

900

SIMA(HEX)

5'-SIMA(HEX)

400

500

800

6-JOE

5'- JOE

500

600

900

3'- JOE

600

700

1000

VIC

5'-VIC

550

800

1200

MGB

3'-MGB

700

900

1300

BHQ1

3'-BHQ1

500

800

1000

6-ROX

5'- ROX

500

600

900

3'- ROX

600

700

1000

6-TAMRA

5'- TAMRA

400

500

800

3'- TAMRA

500

600

900

6-TET

5'- TET

400

500

800

3'- TET

500

600

900

Cy3

5' -Cy3

600

900

1500

Cy5

5' -Cy5

600

900

1500

Dabcyl

3' Dabcyl

500

600

800

Dabsyl

3' Dabsyl

500

600

800

Fluorescein

Fluorescein

1050

1400

1800

 

(4) 双标记荧光探针 (Taqman Probes, HPLC纯化)5'-荧光基团3'-淬灭基团规格(OD) / 价格(元)2 OD5 OD10 OD5'- FAM3' Dabcyl800120018005'- HEX3' Dabcyl900140020005'-TET3' Dabcyl900140020005'- FAM3'- TAMRA750100018003'- BHQ170090015003'-Eclipse850//5'- HEX3'- TAMRA800140020003'- BHQ1900140020003'- BHQ2900140020003'-Eclipse900//5'-TET3'- TAMRA900140020003'- BHQ1900140020003'- BHQ2900140020003'-Eclipse900//5‘-VIC3'-BHQ1900150022005'-ROX3'- BHQ21000120018003'-Eclipse1500//5'-Cy33'-Eclipse1500//3'- BHQ2900160025005'-Cy53'-Eclipse1500//3'- BHQ390016002500

 

(5) MGB探针 （HPLC纯化）5'-3'- 规格(OD) / 价格(元)2 OD5 OD10 OD5'-VIC3'-MGB1300200030005’-FAM3'-MGB120018002800

 

引物合成信息由广州艾基生物技术有限公司为您提供，如您想了解更多关于引物合成报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途