01
背景介绍
在世界范围内，桔青霉素（Citrinin，CIT）是最常见的青霉属（Penicillium）和曲霉属（Aspergillus）某些菌株产生的一种霉菌毒素，主要污染小麦、裸麦、大麦和燕麦等农作物。
CIT含1个羧基，有离子态和非离子态（羧基和相邻的酮基及羟基形成分子内氢键） 2种形式（图1）。
CIT作为一种抗菌素，具有杀死革兰氏阳性细菌的能力，以及抗真菌和抗原虫等功效。
但是，同时CIT对哺乳动物也具有肾脏毒性。
此外，CIT还经常伴随着肾毒素—赫曲霉毒素一同污染水果、肉类和奶酪等食品。
两种或多种霉菌毒素加起来的毒性比任何单一毒素的毒性都大。
红曲霉可产生红曲色素（Monascus pigments，Mps）和抑菌素等多种次级代谢产物，具有降血压、降血糖和降低胆固醇等功效，但部分红曲菌产生的CIT引起了人们对红曲产品安全性的关注。
CIT会污染红曲色素及红曲产品，如霉、酱、红曲米、功能性红曲、酿酒用曲等。
近年来的调查研究发现，CIT对大鼠经口LD50为50 mg/kg；小鼠为112 mg/kg。
有文献报道表明，将CIT污染的米喂大鼠，动物生长缓慢，并且出现肾脏功能和形态改变，排尿量增加。
通过病理学检查可见肾脏明显增大，呈灰白色，肾脏重量为对照组的一倍半。
2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中CIT在3类致癌物清单中。
2019年11月14日，据欧盟官方公报消息，欧盟委员会发布（EU）2019/1901号条例，修订以红曲霉发酵的大米基食品补充剂中CIT的最高限量为100 μg/kg。
图1 CIT结构
本实验参照国家标准《GB 5009.222-2016 食品安全国家标准 食品中桔青霉素的测定》和《QB/T 2847-2007 功能性红曲米》，采用免疫亲和柱-高效液相色谱-荧光法（HPLC-FLD）检测了红曲米中CIT的含量，助力红曲米质量控制。
02
样品制备
参照《GB 5009.222-2016 食品安全国家标准 食品中桔青霉素的测定》中CIT前处理和测试方法。
仪器： | 通微EasySep® 3030二元梯度高效液相色谱仪 |
色谱柱： | 通微 C18柱（4.6×250 mm，5 μm） |
流动相： | 乙腈︰10 mmol/L磷酸水溶液=60︰40 |
流速： | 0.8 mL/min |
检测波长： | 激发波长274 nm； 发射波长440 nm |
柱温： | 35 ℃ |
进样量： | 20 μL |
03
测试结果
方法检出限：5.0 μg/kg；方法定量限：20.0 μg/kg
线性范围：1.0～20.0 ng/mL
相关系数： r2=0.9998
图2 CIT标准色谱图
04
结论
采用EasySep ® 3030液相色谱系统，配备荧光检测器，可以实现红曲米中CIT的检测，满足国家标准要求，方法准确、灵敏度高。
05
配置列表
| 推荐仪器配置 | 通微EasySep® 3030二元梯度高效液相色谱仪（配自动进样器、柱温箱和荧光检测器） |
通微 C18柱（4.6×250 mm，5 μm） | |
通微Unimicro ChromStation色谱工作站 |
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