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高效微流电动液相色谱系统-质谱法在线富集蛋白质

发布时间: 2019-11-14 13:21 来源:上海通微分析技术有限公司

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毛细管电色谱(CEC)结合了高效液相色谱(HPLC)和毛细管电泳(CE)的优点,保留了它们的分离机制,实现了高选择性和高效率,并具有普遍的适用性和良好的样品装载能力。因此,它有可能成为分离复杂混合物的强大工具。 然而,CEC的发展受到各种困难的限制,特别是色谱柱中气泡的形成。为解决这一问题,常用低离子强度的缓冲剂来降低焦耳热。此外,还可以在色谱柱上施加补充压力,称为高效微流电动液相色谱(eHPLC)。在eHPLC系统中,对色谱柱施加的压力抑制了气泡形成。可以通过旋转式进样器实现eHPLC中样品的定量注入。电渗流(EOF)可以与压力流方向相同,也可以与压力流方向相反,由此可以控制样品的洗脱顺序。更重要的是,eHPLC与HPLC相同,可以改变流动相的比例,设置溶剂梯度洗脱模式。
尽管紫外检测器通常用于CEC,但质谱(MS)是一种强大的检测工具,特别是在生化应用过程中,可为各种样品提供高灵敏度和可靠的检测。此外,它还能够提供许多有关分析物结构和特性的信息。迄今为止,eHPLC-MS已成功应用于肽、麦角菌粗提物和对映体的分析。然而,检测灵敏度相对较低仍然是最严重的问题之一,特别是对于蛋白质的分析。因此,有必要开发一种蛋白质的在线富集技术。

我们以细胞色素C、溶菌酶、胰岛素为检测样品,开发了一种可用于低浓度蛋白质样品的分析方法。并且与常规进样相比,此方法检测灵敏度有了明显的提高。

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