高效微流电动液相色谱系统-质谱法在线富集蛋白质

毛细管电色谱（CEC）结合了高效液相色谱（HPLC）和毛细管电泳（CE）的优点，保留了它们的分离机制，实现了高选择性和高效率，并具有普遍的适用性和良好的样品装载能力。因此，它有可能成为分离复杂混合物的强大工具。 然而，CEC的发展受到各种困难的限制，特别是色谱柱中气泡的形成。为解决这一问题，常用低离子强度的缓冲剂来降低焦耳热。此外，还可以在色谱柱上施加补充压力，称为高效微流电动液相色谱（eHPLC）。在eHPLC系统中，对色谱柱施加的压力抑制了气泡形成。可以通过旋转式进样器实现eHPLC中样品的定量注入。电渗流（EOF）可以与压力流方向相同，也可以与压力流方向相反，由此可以控制样品的洗脱顺序。更重要的是，eHPLC与HPLC相同，可以改变流动相的比例，设置溶剂梯度洗脱模式。
尽管紫外检测器通常用于CEC，但质谱（MS）是一种强大的检测工具，特别是在生化应用过程中，可为各种样品提供高灵敏度和可靠的检测。此外，它还能够提供许多有关分析物结构和特性的信息。迄今为止，eHPLC-MS已成功应用于肽、麦角菌粗提物和对映体的分析。然而，检测灵敏度相对较低仍然是最严重的问题之一，特别是对于蛋白质的分析。因此，有必要开发一种蛋白质的在线富集技术。

我们以细胞色素C、溶菌酶、胰岛素为检测样品，开发了一种可用于低浓度蛋白质样品的分析方法。并且与常规进样相比，此方法检测灵敏度有了明显的提高。