酵母双杂交
原理：
酵母双杂交系统的建立基于对真核生物调控转录起始过程的认识。酵母转录因子GAL4含两个结构域：DNA结合功能域和转录激活结构域，前者可识别DNA上的特异序列，并使转录激活结构域定位于所调节基因的上游，后者同转录复合体的其他成分作用，启动相应基因的转录。将编码DNA结合功能域的基因与已知诱饵蛋白质基因构建在同一个表达载体上，在酵母中表达两者的融合蛋白，将编码DNA转录激活域的基因和cDNA文库的基因构建在AD—LIBRARY表达载体上，同时将上述两种载体转化改造后的酵母。当两种载体所表达的融合蛋白能够相互作用时，功能重建的反式作用因子能够激活酵母基因组中的报告基因，从而通过功能互补和显色反应筛选到阳性菌落。将阳性反应的酵母菌株中的AD—LIBRARY载体提取分离出来，从而对载体中插入的文库基因进行测序和分析工作。 在以上传统的酵母双杂交系统中，蛋白之间的相互作用是在细胞核内发生的。 然而许多待研究的蛋白质是膜蛋白, 它们需定位到膜上之后才能表现正常的生物功能，因此根据需要又发展了新的双杂交系统，例如Sos蛋白介导的双杂交系统, 也被称为Sos救活系统(Sos recruitment system)，来弥补传统系统的缺陷。
 
实验流程：
目前我们可提供适用于浆蛋白、核蛋白及膜蛋白酵母双杂交实验服务的两套系统，包括：Clontech GAL4-based two-hybrid system 适用于诱饵蛋白为浆蛋白、核蛋白 ;Stratagene Cytotrap Psos system 适用于诱饵蛋白为膜蛋白。
具体服务内容包括：
1. 蛋白质两两之间相互作用的实验
内容包括：
1). 基因克隆的获得及DNA测序检验；
2). 基因的酵母双杂交载体构建及其DNA测序检验；；
3). 每个基因克隆的酵母双杂交自激活检验；
4). 酵母细胞内的相互作用验证
2. 蛋白质与文库相互作用的实验
内容包括：
1). 诱饵基因克隆的获得及DNA测序检验；
2). 诱饵基因的酵母双杂交载体构建及其DNA测序检验；
3). 诱饵基因的酵母双杂交自激活检验；
4). 酵母双杂交文库筛选；
5). 酵母细胞内的相互作用验证（酵母回转验证）；
6). 阳性克隆DNA序列测定；
 
 
相关要求(客户提供)：
1. 含有诱饵基因片段的质粒或菌株；
2. 用于筛选的文库质粒或菌株。
 
最终结果：
1. 构建得到的诱饵质粒；
2. 自激活及WB检测诱饵基因表达结果；
3. 筛到的相互作用阳性克隆DNA和菌株实物；
4. 具体试验流程(包括：实验步骤；主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号；试剂厂家、批号))；
5. 原始实验图片及数据。
 

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