「青莲百奥聚焦」糖基化研究助力临床PD1/PD-L1阻断的生物疗法

PD1/PD-L1阻断疗法是近年来发展迅速且热门的新疗法。相对于传统放化疗方法，这种疗法显著延长了癌症患者的生存时间，具有明显的优势。然而并不是所有人都适合PD1/PD-L1阻断疗法，以肺癌患者为例，当PD-1的TPS指标<1%时则被认为不适合PD1/PD-L1阻断疗法。真实的PD-1的表达量检测受细胞表面多种因素所影响，如细胞表面的糖基化修饰基团正是其中之一。今天我们就来讲讲糖基化研究是如何指导增强PD1/PD-L1检测效力的。

糖基化蛋白质组学

台湾中国医药大学洪明奇教授团队在国际期刊杂志Cancer Cell上发表文章“Removal of N-Linked Glycosylation Enhances PD-L1 Detection and Predicts Anti-PD-1/PD-L1 Therapeutic Efficacy”，利用糖苷内切酶PNGase F去除细胞表面N糖基化增强PD1/PD-L1检测效力，为临床PD1/PD-L1阻断的生物疗法的有效实施提供理论支持。

研究思路

研究结果

去除N糖基化能增强癌细胞中PD-L1的检测

通过显微共聚焦和ELISA方法比较检测肿瘤细胞用PNGase F处理前后细胞表面PD-L1表达量，研究发现PNGase F处理细胞后PD-L1检测量显著提提高，这表明PD-L1的N糖基化能阻碍其被抗体检测，去除糖基化可能消除抗体识别的空间位阻，因此可以显著提高基于抗体的检测灵敏度。

图1 显微共聚焦和ELISA处理细胞前后PD-L1表达量检测结果

去除N糖基化能增强癌组织样本中PD-L1的检测

用PNGase F处理多肿瘤组织的组织芯片（n=200）并用IHC检测PD-L1并评估H得分，结果显示PD-L1阳性IHC染色的患者数（37.5％-57.5％）在去糖基化后H得分显着增加2倍以上，表明PD-L1的N-糖基化对其识别产生严重影响。另外IHC检测FFPE组织（n=95）比较分析PNGase F处理前后PD-L1的表达量和临床数据的关系，研究发现用PNGase F进行处理后，PD-L1的H得分与患者PFS生存期显着相关，其中有49例患者的OS生存期与PD-L1水平显著相关。证明样品去糖基化能使PD-L1表达评估更准确，能更好地预测对抗PD-1 / PD-L1疗法的临床反应。

图2 不同肿瘤组织PNGase F处理前后H得分数值及PFS生存曲线

去糖基化为病人提供可选择的治疗方式

通过对比研究95例肺癌患者组织样本，约7％-11％的患者，其PD-L1 TPS指标<1％，通过样本去N糖基化后进行常规IHC染色，PD-L1 TPS指标增加至>49％，表明这些患者适合进行PD-1/PD-L1阻断治疗。即去糖基化后增加肿瘤患者的治疗方法的可选择性。并且PNGase F处理过的样品，其风险评估值（HR）明显降低,显着改善免疫疗法反应。

结 论

本文研究显示PD-L1的糖基化阻碍了PD-L1抗体的检测，这可能导致各种生物测定（例如IHC）的结果偏差。通过酶消化从组织样品中去除PD-L1 N-连接的糖基化增加了基于抗体的PD-L1检测，减少了假阴性的可能。因此，在检测之前PD-L1的去糖基化可以提高常规IHC方法的准确性，并扩大患者治疗方法的可选性，为患者造福。

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