日立高新应对培养基中含二肽（丙氨酰谷氨酰胺）氨基酸的测定

        细胞培养所必需的L－谷氨酰胺在水溶液中性质不稳定，分解后会生成对细胞有害的氨。已知氨能够抑制细胞的生长及目标物的生成，于是人们开始使用L－丙氨酰－L－谷氨酰胺（丙氨酰谷氨酰胺、Ala-GluNH2）来代替L－谷氨酰胺。丙氨酰谷氨酰胺是L－丙氨酸和L－谷氨酰胺缩合而成的二肽，在水溶液中的稳定性高，不易生成氨，因此可以进行更长时间的培养。
        在此，我们将介绍使用L-8900型高速全自动氨基酸分析仪，对包括丙氨酰谷氨酰胺在内的42个氨基酸成分进行测定的例子。本例中，我们分别采取生理体液分析和高分离度生理体液分析双柱联用方式进行了测定，同时还将介绍添加了丙氨酰谷氨酰胺的培养基测定例。
 
■标准样品与培养基的测定例（使用生理体液分析柱）
 
分析条件
 

氨基酸标准溶液测定例

样品前处理
 

 
添加了Ala-GluNH2的培养基的测定例

        使用生理体液分析柱对42个氨基酸成分进行了测定。在标准分析方法中，Ala-GluNH2的出峰位置与Cys重叠，但对梯度程序进行了优化后，便可以分离出Ala-GluNH2的峰，从而可以与其他氨基酸一样对该二肽进行定性和定量分析。
 
■标准样品与培养基的测定例（高分离度生理体液分析双柱联用）
 
分析条件

 

 
氨基酸标准溶液测定例

 

 
添加了Ala-GluNH2的培养基的测定例

        如果采用高分离度生理体液分析双柱联用，可以进行更高分离度的测定。由于双柱联用可以通过将两根色谱柱串联的结构对压力进行分散，因此能够实现高速、高分离度的分析。这样不仅可以完全分离Val 和Ala-GluNH2，而且还能够改善中间洗脱出的Ile、Leu、Tyr的峰形，实现更高精度的定量分析。

氨基酸成分名列表

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