利用单倍体育种是克服杂种分离，提高获得纯和材料的效率，缩短育种年限的有效手段。花药离体培养获得单倍体育种在实践中得到应用，油菜花药离体培养已具备一定成熟的经验。玉米、棉花、大豆、拟南芥、番茄、高羊茅、马铃薯、小麦、水稻、烟草等在建设中。

油菜花药培养的方法及程序：

油菜花药培养的方法有几种，但以液体添浮分步培养法效果较好。培养基为keller改良B。

1.花的采摘及小孢子发育时期检验  采收花蕾长1-1.5毫米的主花序3-10厘米作为材料，剪除不不合要求部分，用纱布包好，放入有标记（写明材料来源）的小烧杯中，加入少量清水。用醋酸洋红或PICCH染色液染色，观察小孢子发育时期，在小孢子发育为早核早期（即单核靠边期）培养及为理想，是小孢子启动的zei佳期，容易进行分裂二形成细胞团，这是形成胚状体的先决条件。

2.预处理 把选择好的材料进行低温预处理，放在8-10摄氏度的阴暗处5-8天，以提高胚状体诱导率，一直仿绣体形成，出发小孢子进行异化发育，从而形成二个貌似的核，产生第一次有丝分裂。预处理的作用在于小孢子保持较强的生活力，延迟衰老和防止花粉败育，增加可用活化花粉数。

3.材料的灭菌 将花序在70%的酒精中迅速浸一下，取出放在0.1%***（或饱和漂白粉）溶液，浸泡10f分钟，取出后在超净工作台上剥取花药。

4.接种 在超净工作台上进行无菌剥蕾、取药，注意保留好花药，伤损者剔除，接种在改良B。液体培养基上进行悬浮培养，培养过程如下：

（1）高湿暗培养：培养时间在2-3天，这阶段是小孢子启动分列前期，瓷器的特点是粉壁变薄并开始分裂，分列式均等的，两个子核子在形态上十分相似，这是高湿处理十微管溶解，纺锤体解体的异变分裂的结果。

（2）常温暗培养：培养时间在7-10天，这阶段的作用在于为形成胚状体创造zei佳条件，适合细胞分裂。此期的特点是前期在镜下可见到细胞团，后期出现小胚状体，这期间更换1-2次培养基。

（3）常温光培养：出现胚状后立即转移至光下进行培养，这阶段是黄色胚状体见光后变为绿色，继而发育成小植株。此阶段把形成胚状体的部分移至B。固体培养基或用1/2MS培养基。糖的浓度降至2%。这阶段应保证温度、光热及通气等条件，经常更换培养基，保证其顺利发育。发育的过程一般是先长出不定形叶，继而长出芽点，然后形成正常的单倍体植株。

5.锻炼及成苗  把长出正常植株的三角瓶瓶口打开，在光下锻炼1-2周，取出幼苗，洗净培养基，移苗至培养体中，放在适宜的条件下进行成苗培养。

6.染色体的检验 取幼苗进行鉴定，用对二氯***饱和水溶液预处理4小时，然后固定24小时，通过95%-50%的递降乙醇液，用清水冲洗，放入1N盐酸中浸5-10分钟，换入新的1N盐酸液在60摄氏度的水浴中离解10分钟，过一下凉的1N盐酸，在锡夫氏试剂中染色过夜，用漂洗液漂净，然后水洗，zei后在PICCH染色液或45%的醋酸中压片，在显微镜下鉴定染色体数目。

7.染色体加倍  用0.05%的秋水仙素进行根系浸泡24小时，用水冲洗干净，定植在田圃。

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