MTT法细胞活力测定

MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，化学名称： 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二***基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

操作步骤

1.收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度1000- 10000 /孔。

2.一定条件培养细胞适当时间，至细胞单层铺满96孔平底板,加入浓度梯度的药物。

3.适当条件培养适当时间，倒置显微镜下观察。

4.每孔加入10ul MTT溶液，继续培养1-4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。

5.终止培养，小心吸去孔内培养液。

6.每孔加入100ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。

活力计算：

细胞活力（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）]×100

A（加药）：具有细胞、MTT溶液和药物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培养基和MTT溶液而没有细胞的孔的吸光度

A（0加药）：具有细胞、MTT溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

应用范围

1.抗肿瘤药物筛选

2.细胞毒性试验

3.肿瘤***敏感性测定

服务期限

1-2周。

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途