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稳准快——毛细管电泳开拓病毒载体分析新思路

发布时间: 2020-08-24 14:55 来源:SCIEX

【使用CE-SDS方法进行腺相关病毒(AVV)衣壳蛋白分析】

基因治疗作为一种新的治疗手段,已经进入临床阶段,目前在世界范围内都获得了较大的关注。其中重要的一个环节是需要将目的基因导入人体,进行治疗作用。在引入人体中关注度最多的方法是使用载体进行运载。

腺相关病毒(AAV),由于其安全性好、宿主细胞范围广、免疫源性低、在体内表达外源基因时间长等特点,被视为最有前途的基因转移载体之一,在基因治疗和疫苗研究中得到广泛应用。

为了保证AAV相关产品的安全性和质量,需要研究人员对AAV衣壳蛋白进行纯度分析。但是AAV载体在早期开发过程中,蛋白量很少,只有几微克或者更少,给研究人员的分析带来了挑战。

传统的检测方法包括银染或Sypro红宝石染的SDS -PAGE方法,虽然灵敏度高,但是操作复杂、耗时耗力。科学家们基于毛细管电泳的方法,开发了替代SDS -PAGE的CE-SDS方法,其具有分辨率高、定量准确、重现性好、自动化程度高、速度快等优点。

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图1. CE-SDS 分离模式图


SCIEX利用其多年累积的技术优势,基于毛细管电泳开发了针对腺相关病毒(AAV)衣壳的方法。

该方法主要优势:

  • 简单明了的样品制备程序

  • VP1, VP2, VP3分辨率极

  • 病毒蛋白的CPA%(校正峰面积%)的RSD小于0.7%

  • 样品浓度与吸光度的线性关系良好,R² =0.9991

01、实验条件

实验基于SCIEX PA 800 Plus药物分析系统(配备PDA检测器)和32Karat 软件。使用试剂为商业化的SDS-MW试剂盒。

02、实验结果

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图2. 连续注射1X10¹³GC/mL AAV8样品

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图3. 连续注射0.5X10¹³GC/mL AAV2样品

图2和图3使用不同浓度AAV2和AAV8样品进行连续注射研究,均显示了较好的峰面积的重复性。

通过评估AAV2和AAV8三种病毒蛋白在不同滴度和使用不同预处理方法下校正峰面积的RSD% (CPA%),证明了该方法的优良重复性。计算是基于每个样品溶液连续8次注射。CPA%的RSD%均小于0.7%。

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图4. 对AAV 8样品浓度(10¹³ GC/mL)的吸光度响应值(mAU)呈线性

该方法通过绘制VP3对样品滴度的吸光度响应,证明了从5X1011GC/mL到1x1014GC/mL AAV8样品的良好线性度。R2是0.9991。

03、总结

本文提供了一种腺相关病毒分析的新思路:

使用CE-SDS方法来评估腺相关病毒(AAV)病毒衣壳的纯度;

样品制备方法简单、直接,对浓度较低、数量有限的AAV样品具有较高的灵敏度;

该方法对不同的病毒蛋白具有很好的分辨能力,重复性好。


本文摘录自SCIEX技术文章<Purity Analysis of Adeno-Associated Virus (AAV) Capsid Proteins using CE-SDS Method>,如需了解更多内容,可以发送邮件至wentao.ma@sciex.com索取,感谢您的关注和支持!


标签:CE-SDS AVV 腺相关病毒 毛细管电泳
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