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北京昂立信生物科技有限公司
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iTRAQ技术是由美国应用生物系统公司（Applied Biosystems Incorporation，ABI）研发的一种多肽体外标记技术。该技术利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团，经高精度质谱仪串联分析，可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量。
技术原理
iTRAQ试剂由报告基团、中性平衡基团和肽反应基团三部分组成（如图1），其中反应基团可以同肽段N末端和赖氨酸ε氨基基团发生反应，标记生物样品中产生的所有肽段，平衡基团（31-24Da）用来平衡分子量，保证与每一种报告基团（113-121Da）结合后总的相对分子质量都是145。在质谱分离过程中，不同样本中同一多肽表现为相同的质荷比；经过二级质谱时，平衡基团发生中性丢失，而报告基团在二级质谱低质量区域产生不同报告离子，根据报告离子的信号强度值可获得蛋白质的定量信息。
实验流程
检测仪器
Thermo Scientific Q Exactive
技术特点
1. 液质联用，分离能力强、分析范围广，组织或细胞中可鉴定多达6000种蛋白；
2. 可同时对2-8个样本进行差异蛋白分析；
3. 适合广泛样品类型：胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等；
4. 可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白、难溶性蛋白等。
样本要求
样本类型 | 样本要求 |
蛋白质提取液 | 浓度达1μg/μl，总蛋白量达300μg
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细胞样本 | 细胞量达107 |
组织样本 | 动物、微生物组织湿重达10mg；植物鲜嫩组织达100mg
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体液样本 | 血液体积大于500μl |
代表性文献
1. Rebekka K S, et al. Rps14 haploinsufficiency causes a block in erythroid differentiation mediated by S100A8 and S100A9. Nat Med, 2016; 22: 288-297.
2. Kim M S, et al. A draft map of the human proteome. Nature,2014;509(7502): 575-581.
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