利用具有MaxPeak高性能表面的QuanRecovery样品板开发一种对血清中普兰林肽进行生物定量分析的SPE LC-MS/MS方法

应用优势

1）Waters™ Oasis™肽分离技术(PST) µElution ™ SPE筛选方案可加快肽分析的SPE方法开发

2）采用MaxPeak™高性能表面(HPS)™且与 LC-MS兼容的QuanRecovery样品板可减少普兰林肽的非特异性结合,并使分析达到目标检测限

3）采用ACQUITY™ UPLC™ CSH肽分析专用柱，可提高分析选择性和灵敏度，并使峰宽更窄

4）利用UPLC分离和Xevo™ TQ-XS质谱仪可获得较高灵敏度和准确度

简介

醋酸普兰林肽(SYMLIN™)是一种人工合成的人类激素胰淀素类似物，由37个氨基酸(MW 3949.4 Da)组成。普兰林肽开发用于1型和2型糖尿病患者的辅助治疗，对于接受最理想的胰岛素治疗却仍然无法实现血糖控制的患者有改善治疗效果的作用。普兰林肽的专利到期日愈加临近，且最近有研究表明胰淀素在阿尔茨海默病模型中也发挥了一定作用，因此胰淀素和胰淀素激动剂受到了越来越多的关注。普兰林肽等胰淀素激动剂具有吸收快(<30 min)、代谢清除快(~1 h)以及循环水平低(pg/mL)的特点，因此难以定量。得益于选择性MRM碎片离子所赋予的高灵敏度和特异性，LC-MS/MS技术在肽定量分析领域的应用越来越普遍。但针对普兰林肽等疏水性肽的方法开发和准确定量仍然极具挑战性，原因众所周知，即肽类物质存在非特异性结合(吸附)现象。这种现象可能导致回收率降低、分析物损失且难以达到检测限等问题。本文所介绍的研究采用高选择性的样品制备策略，结合具有高性能表面的LC-MS兼容型样品板，能够减少因非特异性结合而导致的普兰林肽损失。此外，本研究还将证明，采用经过优化的UPLC分离方法和色谱柱，结合高灵敏度串联四极杆质谱仪，可大幅降低定量限。利用这种分析方法萃取100µL大鼠和人血清中的普兰林肽，其LLOQ可达到25 pg/mL。

结论

本文所介绍的研究利用Oasis WCX µElution SPE技术结合具有MaxPeak高性能表面的QuanRecovery样品板开发了一种简便的样品制备策略，将该策略与UPLC分离以及串联四极杆质谱仪联用，实现了对人和大鼠血清中普兰林肽的高灵敏度定量。

1）使用简单的SPE技术进行样品制备，能够快速萃取出复杂基质中的普兰林肽 (少于2小时)

2）QuanRecovery样品板有效减少了非特异性结合，并使纯溶液中普兰林肽的峰面积增加了36倍 

3）利用1.7 µm ACQUITY UPLC CSH C18肽分析专用柱和经过优化的色谱梯度，提高了分析物的选择性并显著降低了基质效应

4）仅需100 µL人(或大鼠)血清，LLOQ即可达到25 pg/mL，并且具有出色的精 密度(CV <5%)和准确度